黄鳝ISSR-PCR反应体系的建立及条件优化

以黄鳝基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,对各反应因子、引物退火温度和循环参数进行优化.建立了黄鳝的最适ISSR-PCR反应体系,25 μl反应体系中含2.5 mmol/ L Mg2+,250 μmol/ L dNTPs,0.25 μmol/ L 引物,1.0 U Taq DNA聚合酶,30 ng DNA模板.最佳反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性40 s,48～57℃复性40 s(随引物而确定),72℃延伸1.5 min,循环次数40;72℃延伸10 min.利用所建立的ISSR反应体系,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带.     

三个地理群体赤眼鳟遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD技术对宿鸭湖、青龙湖和丹江口水库3个野生赤眼鳟群体的遗传多样性进行分析.9个RAPD引物共获得93个扩增位点,其中多态位点56个,多态位点比例为60.22%.3个群体的多态位点比例分别为53.01%、54.12%和57.95%,遗传距离分别为0.1548、0.1613和0.1764,Shannon信息指数分别为0.2249、0.2318和0.2437.群体间遗传距离以宿鸭湖和青龙湖群体最近(0.1257),青龙湖与丹江口水库群体最远(0.1416).结果表明3个赤眼鳟群体的遗传多样性均较丰富,但群体间地理遗传分化差异并不明显.     

三个地理群体赤眼鳟遗传多样性的ISSR分析

利用ISSR分子标记技术,对丹江口水库、青龙湖（河南）和宿鸭湖3个野生赤眼鳟群体90个个体的遗传多样性进行分析。10个ISSR引物共获得96个扩增位点,其中多态位点69个,多态位点比例为71．88％。3个群体的多态位点比例分别为68．13％、64．77％和63．22％,遗传距离分别为0．1885、0．1724和0．1711,Nei基因多样性分别为0．1509、0．1397和0．1385,Shannon信息指数分别为0．2575、0．2403和0．2372。3个群体上述指标差异均不显著（P〉0．05）。丹江口水库与青龙湖群体遗传距离最远（0．1581）,丹江口水库与宿鸭湖群体次之（0．1429）,青龙湖和宿鸭湖群体最近（0．1344）。UPGMA聚类结果为青龙湖与宿鸭湖群体先聚在一起,其次是丹江口水库群体。结果表明：3个赤眼鳟群体的遗传多样性均较丰富,但群体间地理遗传分化差异并不明显。