丙酮酸对细菌L-乳酸发酵的促进作用

研究了丙酮酸在不同浓度和添加时间对LactobacilluscaseiL 乳酸发酵过程中葡萄糖转化率和L 乳酸产量的影响。结果表明 ,当丙酮酸的添加量为 30g·L- 1 时 ,L 乳酸的产量达到 74g·L- 1 。在 72h的发酵周期内 ,丙酮酸在 2 4h和 42h添加的效果好于其他时间添加。     

精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性的时相性抑制作用

精氨酸常在重组蛋白的体外复性中,作为一种小分子添加剂用于抑制蛋白聚集。精氨酸对蛋白复性折叠过程本身的影响尚不清楚。首次以不易聚集的牛胰核糖核酸酶为研究对象,通过飞行质谱检测氧化复性中间体的变化,通过酶学活性检测蛋白活性的恢复过程,观察了精氨酸对氧化复性的直接影响。发现不同浓度精氨酸对牛胰核糖核酸酶的氧化复性有直接的抑制作用。特别在0.5 mol/L浓度时,精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性的抑制作用具有独特的时相依赖性:早期复性可持续至4 h,其活性恢复达30%后,晚期复性基本终止。这种抑制特征与脲的抑制作用有明显的不同,精氨酸没有完全抑制关键结构中间体的形成。结果说明,牛胰核糖核酸酶的氧化复性,除经关键结构中间体的主要通路外,还可能存在一个潜在复性通路,它是其氧化复性后期的关键限速通路。该复性通路可以被0.5 mol/L精氨酸完全阻断。     

小鼠核糖核酸酶抑制剂的高效可溶性表达与氧化抗性鉴定

核糖核酸酶抑制剂(Ribonuclease inhibitor, RI)是一种细胞内能够调节核糖核酸酶活性的胞浆蛋白,在分子生物学涉及RNA的实验中有广泛应用。商品化的小鼠RI(mRI)宣称其可能具有较高的氧化抗性。为获得mRI在大肠杆菌宿主中可溶性活性产物的有效重组表达,构建了含有mRI编码基因的重组质粒载体,在几种不同工程菌中进行了mRI蛋白的表达纯化,并观察了其氧化抗性特征。简单的组氨酸标签融合,即可在蛋白酶基因缺陷的BL21衍生的宿主菌中,经过适当诱导,获得较高水平活性产物的可溶性表达。纯化后产量在4~8mg/L水平,接近其他种属RI特殊优化表达系统的最高产量。该重组mRI与重组人RI(hRI)具有基本一致的核糖核酸酶抑制活性和抗氧化作用,与前人推测的抗氧化特征不同。     

ThiS可能作为一个原核翻译后修饰分子通过二硫键结合细胞蛋白

泛素及其相关蛋白是真核细胞中广泛存在的结构高度保守的一类小分子蛋白,参与蛋白翻译后修饰. 尽管在少数原核种属含有Pupylation这样的翻译后修饰,在原核细胞中尚未发现通用的泛素样修饰系统. ThiS是原核细胞广泛存在的泛素样小蛋白分子,它作为硫转运蛋白参与辅助因子的合成. 当与靶蛋白融合重组表达时,ThiS可降低靶蛋白在大肠杆菌中的稳定性. 本研究旨在探讨ThiS是否可能在原核细胞中参与翻译后修饰. ThiS在大肠杆菌中重组表达时,它可与细胞蛋白游离巯基发生共价结合,但与真核细胞泛素修饰不同,ThiS是通过12位半胱氨酸的游离巯基与蛋白形成二硫键,而不是通过C端活化的硫代羧基的转化过程发生共价结合. 在细胞内,氧化应激可诱导ThiS与蛋白的共价结合. 结果提示,ThiS在大肠杆菌中与细胞蛋白的结合,可能与真核细胞泛素化修饰在功能上存在进化联系;原核细胞中这种ThiS的结合形式可能代表一种古老的原核泛素样修饰方式.     

一种简便可靠的组蛋白乙酰转移酶(HAT)抑制剂荧光检测方法

组蛋白乙酰转移酶(HAT)参与真核细胞基因转录的调节,其抑制剂由于具有调节转录并产生抗病毒、抗炎、抗氧化等作用,有希望成为一类新药.非放射性分光光度HAT测定方法虽然可替代广泛使用的放射性检测方法,但缺乏灵敏度和准确性.建立了一种简单的非放射性荧光检测方法,即测量辅酶A(CoASH)与邻苯二甲醛(OPA)和巯基乙醇反应的荧光产物.此法与分光光度法相比具有更高的准确性,可进行多种化合物HAT抑制活性的筛选.这种新方法有望成为研究转录调节和新药开发方面的一种有效工具.