重组人TACE的解整合素域对人肺腺癌A549体外增殖、粘附和侵袭的抑制作用

为了解人TACE的解整合素域对肿瘤细胞粘附和侵袭的影响以及其独立于其他结构域发挥作用的能力,从单核细胞系THP1中提取RNA,RT-PCR扩增出TACE全长基因,构建了pMD18T-TACE载体。对pMD18T-TACE质粒进行PCR,分别扩增T300(300bp,编码解整合素域)、T800(800bp,编码酶催化域)及T1300(1300bp,编码胞外域)三个片段,将其分别亚克隆至表达载体pET28a( )。把质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物均以不溶性包涵体形式存在。经过溶解包涵体、BBSTNTA树脂柱亲和层析并透析复性,获得高纯度的三种活性蛋白。MTT法、细胞粘附实验、Transwell小室侵袭实验分别显示TACE解整合素域、胞外域蛋白均能明显抑制A549细胞的增殖,且以剂量依赖性的方式抑制A549细胞与纤维粘连蛋白的粘附,并能抑制Transwell小室中A549细胞对Matrigel模拟的天然基底膜的侵袭,而酶催化域蛋白则无相应的抑制能力。表明重组TACE解整合素域蛋白可独立抑制肿瘤细胞的增殖、粘附和侵袭,为深入研究该区域的作用及TACE在肿瘤发病中的机制提供了新的认识。     

两类金属蛋白酶在炎性细胞模型中的变化及中药RDQ的天然抑制效应

目的 探讨金属蛋白酶（MPs）家族的MMPs和ADAMs两亚类成分在前体TNF-α （mTNF-α）向成熟型TNF-α （sTNF-α）转化过程所起的作用,MMPs在炎症过程中活性的变化和中药RDQ抗炎保护功效的分子机制,为人工干预炎症过程提供依据和手段.方法 以IPS刺激HL-60细胞为天然模型,用细胞学和分子生物学技术在蛋白质和mRNA水平上研究MMPs、ADAM17、TNF-α在炎症过程中的表达和活性变化.结果 ①LPS刺激后,HL50细胞上清中MMPs的活性随刺激时间延长逐渐减弱,胞浆裂解物中的MMPs则随刺激时间延长活性增加但LPS刺激对MMPs mRNA的表达影响不大;②LPS刺激能使HL-60细胞中ADAM17 mRNA和TNF-α mRNA表达在6 h同时达高峰;③RDQ能明显降低LPS诱导的ADAM17 mRNA的增加,并能抑制sTNF-α的分泌.结论 ①ADAM17对sTNF-α的产生起主导作用;②纯中药注射液热毒清（RDQ）能调节TACE的表达,最终抑制TNF-α的分泌.     

重组人TAGE的解整合素域对人肺腺癌A549体外增殖、粘附和侵袭的抑制作用

为了解人TAGE的解整合素域对肿瘤细胞粘附和侵袭的影响以及其独立于其他结构域发挥作用的能力,从单核细胞系THP1中提取RNA,RT-PCR扩增出TAGE全长基因,构建了pMD18T-TAGE载体.对pMD18T-TAGE质粒进行PCR,分别扩增T300(300bp,编码解整合素域)、T800(800bp,编码酶催化域)及T1300(1300bp,编码胞外域)三个片段,将其分别亚克隆至表达载体pET28a(+).把质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),表达产物均以不溶性包涵体形式存在.经过溶解包涵体、BBST NTA树脂枉亲和层析并透析复性,获得高纯度的三种活性蛋白.MTT法、细胞粘附实验、Transwell小室侵袭实验分别显示TAGE解整合素域、胞外域蛋白均能明显抑制A549细胞的增殖,且以剂量依赖性的方式抑制A549细胞与纤维粘连蛋白的粘附,并能抑制Transwell小室中A549细胞对Matrigel模拟的天然基底膜的侵袭,而酶催化域蛋白则无相应的抑制能力.表明重组TAGE解整合素域蛋白可独立抑制肿瘤细胞的增殖、粘附和侵袭,为深入研究该区域的作用及TAGE在肿瘤发病中的机制提供了新的认识.