外源蛋白在大肠杆菌中的表达定位策略

外源基因在大肠杆菌中表达是对基因重组技术的成功应用。外源基因在不同的大肠杆菌表达系统中表达产物可能定位于大肠杆菌空间结构的不同位置:胞质,胞质膜,胞周质,胞外膜和胞外培养基,五种表达定位方式各有其特点和用途 。     

外源蛋白在大肠杆菌中的表达定位策略

外源基因在大肠杆菌中表达是对基因重组技术的成功应用。外源基因在不同的大肠杆菌表达系统中表达产物可能定位于大肠杆菌空间结构的不同位置：胞质,胞质膜,胞周质,胞外膜和胞外培养基,五种表达定位方式各有其特点和途径。     

重组截短型人源结缔组织生长因子在大肠杆菌中的表达

用RT－PCR法从人胎盘组织中克隆出人源结缔组织生长因子（h-CTGF)cDNA序列867bp,将此cDNA亚克隆至表达载体pET-9a,重组质粒转化BL21（DE3）pLysS,诱导出N端缺失61个氨基酸残基的截短型rh－CTGF,表达量占总菌体蛋白的7％,主要以不溶性包涵体形式存在,采用离心、洗涤和凝胶过滤分离纯化后,行活性检测表明截短型rt-CTGF无刺激增殖活性,并对用原核表达rt-CTGF作了讨论,为制备抗体、CTGF表达调控和功能研究打下了基础。     

人异体移植炎症因子在大肠杆菌中的表达和纯化

应用ＰＣＲ技术,将人异体移植炎症因子１（ｈＡＩＦ－１）基因ｃＤＮＡ 从克隆载体ｐＳＣ－１／ＡＩＦ－１ 中扩增,经酶切后与原核表达载体ｐＫＫ２２３－３ 连接,转化大肠杆菌ＪＭ１０９,在异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后筛选阳性表达株,并对其表达产物进行了分离纯化,得到了电泳纯产品．产物的表观分子质量约１．６×１０４ｕ,经蛋白质测序Ｎ 端正确,但Ｃ端缺少７ 个氨基酸残基．在蛋白质一级结构的基础上,利用计算机软件对其蛋白质特征和有关功能作了初步鉴定和预测, 对外源基因在原核表达系统中的表达策略作了初步探讨,为ｈＡＩＦ－１ 的结构和功能研究打下了基础,对于以后用基因工程方法生产该物质,并用于临床具有一定意义．     

蚯蚓复合氨基酸提取液的毒理及生化实验研究

<正> 我们实验室曾对太平Ⅱ号蚯蚓做了一系列的生化指标测定,根据我们的测定结果及张洪志等的报导,肯定了蚯蚓的营养价值,这对干蚯蚓的综合利用具有重要的意义。由于蚯蚓体中成份极为复杂,蚓体中提取的氨基酸对机体的影响如何?有关资料尚少。因此我们进行了几项毒理及生化实验研究。对不同剂量的大白鼠进行了一般活动、状况、体重、血象、生化和病理切片检查,实验结果如下:     

结肠腺瘤性息肉病蛋白通过与SMAP/KAP3相互作用与微管结合

结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)的突变导致家族性结肠息肉腺瘤病和散发性结肠癌,APC基因编码一个具有多个结构域、多种磷酸化状态的大分子蛋白质.APC蛋白可通过C段直接或间接与微管结合,同时还可以通过中段与微管结合,但其结合的机制目前还不清楚.为进一步研究APC与其他蛋白质的相互作用,利用酵母双杂交技术运用APC中段（1 500 bp～4 800 bp）构建诱饵质粒,筛选人胎脑cDNA文库,得到一个与APC相互作用的蛋白SMAP/KAP3,SMAP/KAP3是驱动蛋白KIF3A/3B的相关蛋白.通过免疫共沉淀和双色免疫荧光共定位的方法,证实了APC与SMAP/KAP3在体内的相互作用,提示APC可能通过SMAP/KAP3-KIF3A/B参与沿微管的运动.