日本沼虾几丁质酶1C(MnCht1C)基因的克隆及表达分析

本研究从日本沼虾精巢均一化c DNA文库中筛选到一条Mn Cht1C表达序列片段(expressed sequence tags,EST),该序列具有完整的基因编码区,编码区长度为1 473 bp,编码490个氨基酸。Mn Cht1C编码的蛋白质具有完整的几丁质酶结构,N端的前23个氨基酸为信号肽,第24~406位氨基酸序列为几丁质酶催化结构域(catalytic domain),第407~433位氨基酸序列为Ser/Thr富含区(S/T-rich linker),其作用在于连接催化结构域与几丁质结合结构域。q PCR分析Mn Cht1C在日本沼虾各组织和各发育阶段表达情况,研究发现其主要在肝胰腺、肠、眼柄、表皮、精巢5种组织中表达;幼体发育时期不表达,而直至变态时期才开始表达。Mn Cht1C在日本沼虾整个蜕壳周期的表达呈波动性,蜕壳中期表达水平最高,随着蜕壳这一生理过程的完成,其表达水平也相应地下降直至蜕壳间期无表达水平检出,随着新一轮蜕壳的进行,其表达水平又开始逐渐升高。本研究结果为研究几丁质酶基因在日本沼虾和其他甲壳动物蜕壳及生殖发育中的作用提供参考。     

不同碳氮比对生物絮团形成及对日本沼虾生长、抗氧化酶和消化酶的影响

为了研究不同碳氮比对生物絮团形成及对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)生长、抗氧化酶和消化酶的影响, 设置5个不同实验组[对照组(不做任何添加), 碳氮比10组(C/N10)、碳氮比15组(C/N15)、碳氮比20组(C/N20)和碳氮比25组(C/N25)], 每组设三重复; 将初始体重(0.25±0.03) g的日本沼虾置于不同碳氮比的玻璃缸(30 cm×40 cm×100 cm)中, 进行50d的饲养实验。研究结果表明, 随着碳氮比升高, 生物絮团含量有上升趋势, 生物絮团含量C/N20>C/N25>C/N15>C/N10, C/N20生物絮团最多, 生物絮团体积和总固体悬浮物分别为(328.67±7.09) mL/L和(40.33±1.53) mg/L而C/N10几乎没有生物絮团产生, C/N15和C/N25有少量生物絮团, 但含量显著低于C/N20。对照组的氨氮和亚硝酸氮浓度持续升高, C/N10和C/N25的氨氮和亚硝酸氮浓度有较大波动, 先升高后降低, 随后又有升高的趋势, 氨氮和亚硝酸氮浓度分别高于2和1.5 mg/L, C/N15和C/N20的氨氮和亚硝酸氮浓度在整个养殖期间都维持在较低水平, 氨氮和亚硝酸氮浓度分别低于0.35和0.6 mg/L, 且无剧烈波动。增重率依次是C/N20>C/N25>C/N15>C/N10>Control, C/N10、C/N15、C/N20和C/N25分别比对照组高出29.69%、50.22%、89.52%和75.98%(P<0.05); 特定生长率依次是C/N20>C/N25>C/N15>C/N10>Control, C/N10和C/N15、C/N20和C/N25分别比对照组高出18.41%、24.69%、42.26%和33.89%(P<0.05); 在抗氧化酶方面, 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性C/N20>C/N25>C/N15>C/N10>Control, 与对照组相比, C/N10、C/N15、C/N20和C/N25分别高出1.70%、21.42%、43.19%和31.49%(P<0.05); 超氧化物歧化酶(SOD)活性C/N20>C/N25>C/N15>C/N10>Control, 与对照组相比, C/N10、C/N15、C/N20和C/N25分别高了19.34%、35.26%、73.35%和47.12%。在消化酶方面, 淀粉酶活性依次是C/N20>C/N15>C/N25>Control>C/N10, 与对照组相比, C/N15、C/N20和C/N25分别高出68.09%、231.91%和42.55%(P<0.05); 脂肪酶活性依次是C/N20>C/N25>C/N15>Control>C/N10, 与对照组相比, C/N15、C/N20和C/N25分别高出2.86%、25.45%和23.12%(P<0.05); 胰蛋白酶活性依次是C/N20>C/N25>C/N15>C/N10>Control, 与对照组相比, C/N10、C/N15、C/N20和C/N25组分别高出12.98%、14.52%、36.45%和24.63%(P<0.05)。研究结果提示, 日本沼虾在生物絮团养殖模式下, 当碳氮比达到20时能有效产生生物絮团, 降低水体氨氮和亚硝酸氮浓度并显著提高日本沼虾的生长性能、肠道消化酶活性和肝胰腺抗氧化酶活性。