植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein基因在乙醇氧化酶缺陷型甲醇酵母中的表达及其活性分析

采用BglⅡ酶切重组表达载体pPIC9K-Bra,纯化后电击转化甲醇酵母菌GS115,构建乙醇氧化酶缺陷型表达菌株GS115-pPIC9K-Bra,筛选鉴定后,以0.5％的甲醇进行诱导,表达的目的蛋白约占上清总蛋白的95％,纯度较高,并具有一定的甜度.成功构建了乙醇氧化酶缺陷型的甲醇酵母表达菌株,为深入研究其应用奠定了基础.     

小麦类根瘤中胞间细菌的运动及其对细胞壁的影响

用电子显微镜和光学显微镜观察了小麦类根瘤,以探讨小麦类根瘤中胞间细菌的运动及其对细胞壁的影响.结果表明:(1)小麦类根瘤由薄壁细胞、分生细胞和侵染细胞组成,它们中有许多胞间隙,其中一些还含有大量细菌;它们的胞间层常常彼此分离,形成间隙,间隙中有时也有细菌存在;(2)小麦类根瘤中没有侵入线,细菌运动主要在胞间进行;具有细菌的胞间隙和胞间层大小不等、形状各异,其细胞壁还常常出现不同程度的变化,变化的大小一般与它们中的细菌有关,且随细菌数量的增加而增加.     

河南地方野生小鼠与近交系小鼠的扩增片段长度多态性分析

目的 从分子水平上阐明河南省兰考地区捕获的野生小鼠(LK)与4个小鼠品系(B6,BALB/c,DDK,PWK)之间的遗传差异及遗传关系,从而进一步确定该种野生小鼠的种属及培育野生来源近交系小鼠品系.方法 利用25对引物,对野生小鼠及4个小鼠品系进行扩增片段长度多态性(AFLP)分析.结果 检测到2035条扩增条带,多态...     

植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein的密码子优化及其在毕氏酵母中的表达

根据甜蛋白des-pGlu1-Brazzein的成熟区氨基酸序列,按照酵母密码子的偏好优化其编码序列,合成了4对末端具粘合位点的寡聚核苷酸序列,经连接、PCR扩增后得到了179 bp的des-pGlu1-Brazzein编码序列,插入到pPIC9K载体中,构建了重组表达载体pPIC9K-Bra。经酶切、电击转化到毕赤酵母菌GS115中。酵母工程菌株经筛选鉴定后诱导表达,目的蛋白的表达量约占上清总蛋白的51.6％,分离纯化后的des-pGlu1-Brazzein具有一定的甜度。     

人b防御素3和植物des-pGLu1-brazzein融合蛋白表达菌的诱导条件优化及其活性分析

对人b防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein嵌合基因的工程菌株BL-pET-hBD3-Bra的IPTG诱导表达条件进行了研究, 同时对所表达的目的蛋白进行了纯化和活性分析。IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对菌株生长和目的蛋白表达的试验结果显示: 所取的IPTG浓度(0.2~1.0 mmol/L)对菌株生长和目的蛋白的表达无显著影响(P>0.05); 菌株的生物量随着诱导时间的延长而增加, 6 h优于4 h(P<0.01), 但是蛋白的表达量无明显增加(P>0.05); 其中温度是重要的影响因素, 在30°C诱导时, 目的蛋白的表达量占总蛋白的35%左右。进一步的研究表明, 菌株在30°C~32°C生长, 在 30°C诱导最优。对目的蛋白的活性分析表明, 所得到的hBD3-Bra融合蛋白有甜味, 其甜度大约是蔗糖的200倍, 但是其杀菌活性很弱, 经凝血酶切割后, des-pGlu1-Brazzein的甜度大大提高, 大约为蔗糖甜度的600倍, 重组hBD3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑菌活性。     

人β防御素3和植物des-pGLu1-brazzein融合蛋白表达菌的诱导条件优化及其活性分析

对人β防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein嵌合基因的工程菌株BL-pET-hBD3-Bra的IPTG诱导表达条件进行了研究,同时对所表达的目的蛋白进行了纯化和活性分析.IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对菌株生长和目的蛋白表达的试验结果显示:所取的IPTG浓度(0.2～1.0 mmol/L)对菌株生长和目的蛋白的表达无显著影响(P>0.05);菌株的生物量随着诱导时间的延长而增加,6 h优于4 h(P<0.01),但是蛋白的表达量无明显增加(P>0.05);其中温度是重要的影响因素,在30℃诱导时,目的蛋白的表达量占总蛋白的35%左右.进一步的研究表明,菌株在30℃-32℃生长,在30℃诱导最优.对目的蛋白的活性分析表明,所得到的hBD3-Bra融合蛋白有甜味,其甜度大约是蔗糖的200倍,但是其杀菌活性很弱,经凝血酶切割后,des-pGlu1-Brazzein的甜度大大提高,大约为蔗糖甜度的600倍,重组hBD3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑菌活性.     

人b防御素3和植物des-pGLu1-brazzein融合蛋白表达菌的诱导条件优化及其活性分析

对人b防御素3和植物甜蛋白des-pGlu1-Brazzein嵌合基因的工程菌株BL-pET-hBD3-Bra的IPTG诱导表达条件进行了研究, 同时对所表达的目的蛋白进行了纯化和活性分析。IPTG浓度、诱导时间和诱导温度对菌株生长和目的蛋白表达的试验结果显示: 所取的IPTG浓度(0.2~1.0 mmol/L)对菌株生长和目的蛋白的表达无显著影响(P>0.05); 菌株的生物量随着诱导时间的延长而增加, 6 h优于4 h(P<0.01), 但是蛋白的表达量无明显增加(P>0.05); 其中温度是重要的影响因素, 在30°C诱导时, 目的蛋白的表达量占总蛋白的35%左右。进一步的研究表明, 菌株在30°C~32°C生长, 在 30°C诱导最优。对目的蛋白的活性分析表明, 所得到的hBD3-Bra融合蛋白有甜味, 其甜度大约是蔗糖的200倍, 但是其杀菌活性很弱, 经凝血酶切割后, des-pGlu1-Brazzein的甜度大大提高, 大约为蔗糖甜度的600倍, 重组hBD3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有明显的抑菌活性。