Vi-PHA试剂的研制及其在检测伤寒带菌者中的应用

用纯化伤寒沙门氏菌的Vi抗原,以1 μg／ml量致敏鞣化醛化绵羊红细胞,研制成Vi—PHA试剂,用于伤寒病后慢性带菌者的检出及食品从业人员伤寒健康带菌者的筛选。具有敏感性高、特异性强和稳定性好等特点。本试剂能检出1．16μg／ml Vi-抗体。对健康人群血清无交叉,而与非伤寒病种患者血清仅有0．84％交叉反应。用于检测274例伤寒病后3个月以上和1年以内康复者血清,阳性19例,占6．93％。其中14例粪便培养出伤寒沙门氏菌,占Vi—PHA总阳性率的73．68％o 106例疫区食品从业人员Vi—PHA阳性3例,其中1例培养出伤寒沙门氏菌。255例Vi—PHA≤1：20的伤寒病后康复者,无1例粪检阳性。结果表明,伤寒康复者血清中Vi抗体与其体内带菌具有较高的特异性和相关性。此外,本试剂所采用的方法操作简便,时间快速,结果判断清晰,易在基层推广。     

汉滩病毒A9株强毒和弱毒克隆M基因片段G1糖蛋白编码区核苷酸序列…

采用逆转录－ＰＣＲ方法,用３对引物分３个片段扩增强毒克隆（Ａ９ｖ）及弱毒克隆（Ａ３９ｓ）的Ｍ基因片段ｃＤＮＡ并克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中,采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测定了Ａ３９ｓ,Ａ９ｖ病毒Ｇ１糖蛋白编码区的全序列,发现二者均由１９７８个核苷酸组成,比７６／１１８株少６个核苷酸,并发现Ａ３９ｓ在Ｇ１编码区有３３个碱基及８个氨基酸与Ａ９ｖ不同,进一步与７６／１１８,ＨＶ１１４的相关序列比较,发现Ｇ１编码     

应用反转录——套式PCR方法检测肾综合征出血热病人血清中的汉坦病…

采用５’端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针,结合磁性分离技术和异硫氰酸胍－酚一步法（胍酚法）提了病毒ＲＮＡ,进行反转录－套式ＰＣＲ,检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病人血清样本,胍酚法能检测血清中至少几个ＰＦＵ病毒的ＲＮＡ〉比磁珠法敏感１０倍,整个检测过程在５小时完成。应用该方法对１３７份汉滩型和汉城型ＨＦＲＳ病人血清进行检测分型,总阳性率达６０．５０％。其中,病程在７日以内（急性期）的从血清仍     

应用反转录-套式PCR方法检测肾综合征出血热病人血清中的汉坦病毒特异性RNA

采用５′端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针,结合磁性分离技术和异硫氰酸胍－酚一步法（胍酚法）提取病毒ＲＮＡ,进行反转录－套式ＰＣＲ,检测肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病人血清样本,胍酚法能检测血清中至少几个ＰＦＵ病毒的ＲＮＡ,比磁珠法敏感１０倍,整个检测过程在５小时完成。应用该方法对１３７份汉滩型和汉城型ＨＦＲＳ病人血清进行检测分型,总阳性率达６０．５０％。其中,病程在７日以内（急性期）的病人血清仍能检测到２２．７３％阳性率。扩增产物经打点杂交检测证实为特异性扩增,并能准确分型。与空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）分型的符合率为１００％。对２０份正常人及２４份非ＨＦＲＳ患者血清进行ＰＣＲ扩增,结果均为阴性。将全部试剂做成试剂盒,为基层单位早期诊断肾综合征出血热病人提供了操作简便、特异、敏感、快速、直接的诊断方法。     

vi—PHA试剂的研制及其在检测伤寒带者中的应用

Purified S. typhi Vi antigen is sensitized with equal volume of tannic acid treated formalational sheep erythrocytes (SRBC) at a final concentration of 1 microgram/ml. The Vi-passive hemagglutination assay (Vi-PHA) diagnostic reagent is developed to detect Vi antibodies to S. typhi for the detection of chronic carriers after typhoid fever and the screening S. typhi healthy carriers from food-handlers, which is characterized with high sensitivity, strong specificity and good stability. This Vi-PHA reagent is able to detect 1.16 micrograms/ml of Vi antibodies and doesn't make any cross reaction with healthy sera. For the sera of other diseases, the cross rate is only 0.84%. Using this reagent, 19 positive sera (6.93%) are detected from 274 convalescent sera from typhoid fever, 14 convalescents of which are stool-culture S. typhi positive, that persists a positive rate of 73.68%; 3 positive sera are detected from 106 foodhandlers, one of which is stool-culture S. typhi positive. Therefore, the reagent is simple, convenient, rapid and easy to be applicated in basic unit.     

汉滩病毒A9株强毒和弱毒克隆M基因片段G1糖蛋白编码区核苷酸序列的分析比较

采用逆转录－ＰＣＲ方法,用３对引物分３个片段扩增强毒克隆（Ａ９ｖ）及弱毒克隆（Ａ３％）的Ｍ基因片段ｃＤＮＡ,并克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体中。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测定了Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ病毒Ｇ１糖蛋白编码区的全序列,发现二者均由１９７８个核苷酸组成,比７６／１１８株少６个核苷酸,并发现Ａ３９ｓ在Ｇ１编码区有３３个碱基及８个氨基酸与Ａ９ｖ不同。进一步与７６／１１８、ＨＶ１１４的相关序列比较,发现Ｇ１编码区的第６０６、６１４位氨基酸的变异同Ａ３９ｓ病毒的减毒有一定相关。从Ａ３９ｓ、Ａ９ｖ、７６／１１８及ＨＶ１１４４株病毒Ｇ１糖蛋白编码区推导的氨基酸序列亲疏水性资料显示,在位于Ｇ１糖蛋白Ｃ末端的最大亲水区域的６００～６２０位氨基酸区域,弱毒株Ａ３９ｓ同强毒株Ａ９ｖ、７６／１１８、ＨＶ１１４的亲水性有明显不同,而这一差异又主要由第６１４位氨基酸的变异所引起。因此推测,Ｇ１糖蛋白Ｃ端亲水区域同汉滩病毒毒力相关,而第６１４位的精氨酸被谷氨酰胺取代,同Ａ３９ｓ病毒毒力的减弱可能有关。