多发性骨髓瘤患者13q14.3区域一个候选抑瘤基因MYETS1的克隆与序列分析

为克隆位于多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者染色体13q14.2～13q21.1区域候选抑瘤基因,通过生物信息学分析获取疾病基因定位区域内代表新基因的ESTs,并运用半定量RT-PCR检测它们在正常人与MM患者骨髓组织中的表达水平,发现一条在MM患者骨髓组织中明显表达下调的EST(GenBank收录号:H86826).Northern印迹杂交显示H86826在骨髓组织中转录本大小为1.5kb.通过购买商品化克隆IM-AGE223589测序获得了H86826所代表的基因的1491 bp全长cDNA序列(GenBank收录号:AY368652),人类基因组命名委员会将其命名为MYETS1(myeloma tumor suppressor 1).生物信息学分析其为一个编码分子质量为15.1 kD、等电点为6.13的135个氨基酸的新基因.该基因的功能正在进一步的研究之中.     

东方田鼠骨髓基因池的构建及抗日本血吸虫抗性相关基因的筛选

利用表达克隆法,从东方田鼠骨髓细胞中克隆出抗日本血吸虫抗性相关基因．首先提取高质量的mRNA,逆转录成cDNA,将cDNA与哺乳动物细胞瞬时表达载体pcDNA1．1／Amp连接,建立表达cDNA文库;将cDNA文库分成A—H8个基因池,转染HEK293细胞,48h后收集培养上清,获得条件培养基．将条件培养基与日本血吸虫童虫一起培养,观察杀虫效应,取对童虫抑制作用最强的基因池E再分成8个亚基因池E1-8,分别转染HEK293细胞,并将条件培养基与血吸虫童虫一起培养,获得具有明显抑制血吸虫童虫活性的亚基因池E77,按上述方法反复进行筛选,直到获得有抑制作用的单个克隆,该技术的建立为克隆东方田鼠抗日本血吸虫抗性相关基因以及研究其作用机制奠定基础．     

金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药辅助基因femB的克隆和原核表达

金黄色葡萄球菌femB基因与甲氧西林高水平耐药密切相关,可能成为开发抗MRSA药物的新靶位.以金葡菌基因组DNA为模板,PCR扩增femB全长基因,所得片段与pGM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆以PCR、双酶切及测序鉴定.将鉴定正确的目的片段定向克隆到pGEX-4T-1表达载体中,转化至大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达GST/FemB融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot对融合蛋白进行鉴定.结果显示,重组质粒在宿主菌中获得了高效表达,融合蛋白相对分子质量为75 kD,该融合蛋白可与抗GST-tag抗体特异结合;表明femB基因的原核表达系统构建成功,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.     

在诊断结核性脑膜炎中聚合酶链反应与其他方法的比较

本研究对1997年4月～1998年6月来自131个病人的131份标本进行了插入序列(IS)6110的套式聚合酶链反应(PCR)分析.如果所取标本量＞1 ml,则多余的脑脊液接种在MB BaeT培养基及Lowenstein-Jensen斜面上进行培养;如果标本量＜1 ml,则所有标本均用来作PCR.     

病毒核酸定量测定及其医学意义

病毒核酸定量测定对病毒性疾病的诊断和治疗,了解病毒感染与疾病的发生、发展的关系,探讨药物对病毒的作用及抗病毒治疗效果的考核和评价,都有很和重要的作用。本文从核酸杂交技术、ＰＣＲ技术、ＮＡＳＢＡ技术及ｂＤＮＡ技术４个方面对病毒核酸定量测定的分子生物学方法以及病毒核酸定量测定在医学上的意义作一简要综述。     

His-FemA融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

目的 构建His标签的金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药相关蛋白FemA的融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌中表达,为进一步研究femA基因的生物学功能和临床应用奠定基础.方法 根据GenBank中金黄色葡萄球菌femA基因序列,利用Primer Premier 5.0设计PCR引物,并在引物的5'加入BamHI及SalI酶切位点;以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模版,PCR扩增出femA基因片段.将目的DNA片段及质粒pQE30分别进行双酶切、连接并转化大肠埃希菌DH5α;阳性克隆以PCR、双酶切及测序进行鉴定.将鉴定正确的pQE30-femA重组质粒转化大肠埃希菌JM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His-femA融合蛋白;采用SDS-PAGE及Western blot分析对表达蛋白进行验证.结果 经PCR、双酶切签定及序列测定,证实重组质粒pQE30-femA构建成功;重组质粒pQE30-femA转化大肠埃希菌JM109经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western blot分析显示表达出53 kD目的蛋白;经Bandscan软件分析,目的蛋白质在4h的表达量占细胞总蛋白的27.5％.结论 成功构建了His-FemA原核表达载体(pQE30-femA),并在大肠埃希菌中高效表达.     

多发性骨髓瘤患者13q14．3区域一个候选抑瘤基因MYETSl的克隆与序列分析

为克隆位于多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者染色体13q14．2～13q21．1区域候选抑瘤基因．通过生物信息学分析获取疾病基因定位区域内代表新基因的ESTs,并运用半定量RT—PCR检测它们在正常人与MM患者骨髓组织中的表达水平,发现一条在MM患者骨髓组织中明显表达下调的EsT(cenBank收录号：H86826)．Northern印迹杂交显示H86826在骨髓组织中转录本大小为1．5kh．通过购买商品化克隆IM．AGE223589测序获得了H86826所代表的基因的1491bp全长cDNA序列(GenBank收录号：AY368652)．人类基因组命名委员会将其命名为MYETSl(myeloma tumor suppressor1)．生物信息学分析其为一个编码分子质量为15．1kD、等电点为6．13的135个氨基酸的新基因．该基因的功能正在进一步的研究之中．