重组鸡痘病毒rFPV_(Hg-Hp)理化特性检测

目的:检测各理化因素对重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp的影响,为临床前研究奠定基础。方法:将重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声破碎、紫外线照射处理后,接种于CEF细胞,通过测定TCID50观察重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp毒力活性的变化,由此分析这些理化因素对重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp的影响。结果与结论:重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp不耐高温,在55℃作用45 min或60℃作用15 min即可完全灭活;但是其对酸和乙醚具有一定的耐受性,在p H值为3~9的范围内,p H值的变化对病毒滴度无明显影响;同时紫外线照射无法使得培养基中的病毒粒子完全灭活;该病毒对氯仿、胰蛋白酶较为敏感,二者均可使病毒滴度下降;在适应的条件下,重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp对超声波具有一定的耐受性。     

表达猴免疫缺陷病毒Env蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选

目的:构建并筛选表达猴免疫缺陷病毒(SIV)Env蛋白的重组鸡痘病毒(FPV),并对其进行鉴定。方法:设计引物,通过PCR技术扩增SIV env基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的FPV穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pTKET-SIV env,然后将其与FPV282E4株共转染原代鸡胚成纤维细胞进行同源重组,以增强型绿色荧光蛋白为筛选标记,通过噬斑筛选获得重组病毒,应用PCR、RT-PCR、Western印迹对重组病毒进行鉴定和遗传稳定性分析。结果:通过10次噬斑筛选,PCR检测表明目的基因已整合到重组FPV基因组中,RT-PCR、Western印迹结果表明SIV Env蛋白在感染细胞内表达且具有抗原性;连续传代20次,PCR、RT-PCR、Western印迹均能检测到外源基因的整合、转录和表达,且未能扩增出FPV-TK基因,表明重组病毒遗传稳定性良好,且病毒已经纯化。结论:获得表达SIV Env蛋白的重组FPV,为进一步免疫试验研究奠定了基础。