PR8F/NS1不同位点突变株对小鼠致病性的比较研究

为了探索NS1不同位点突变对流感病毒毒力的影响以及NS1毒力相关位点的作用机制。分析流感病毒NS1蛋白的毒力相关关键基因区段和关键位点,以实验室保存的H1N1亚型流感病毒PR8F为模板,对其NS1基因的第42、81、149位氨基酸分别进行定点突变。利用反向遗传操作技术,成功拯救出突变毒株PR8F-42、PR8F-81、PR8F-149。将获救病毒接种SPF鸡胚,连续传代5代,至病毒能够稳定扩增后,通过血凝效价分析病毒复制效率。并将获救病毒与PR8F均以106 TCID50/100μL感染BALB/c小鼠,观察各组小鼠临床表现、体重变化及存活率。剖检攻毒后死亡小鼠,观察病理特征,制作肺组织病理切片。并提取小鼠肺脏RNA,通过qPCR检测各组小鼠肺脏的病毒载量。结果表明,PR8F的NS1蛋白第42位氨基酸由丝氨酸(Ser)改变为脯氨酸(Pro)对小鼠的致病性无明显改变。第81位、149位氨基酸突变则都能减弱突变株对小鼠的致病性,进而为研究NS1毒力相关位点的作用机制提供平台。     

重组鸡痘病毒rFPV_(Hg-Hp)理化特性检测

目的:检测各理化因素对重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp的影响,为临床前研究奠定基础。方法:将重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp经热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声破碎、紫外线照射处理后,接种于CEF细胞,通过测定TCID50观察重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp毒力活性的变化,由此分析这些理化因素对重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp的影响。结果与结论:重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp不耐高温,在55℃作用45 min或60℃作用15 min即可完全灭活;但是其对酸和乙醚具有一定的耐受性,在p H值为3~9的范围内,p H值的变化对病毒滴度无明显影响;同时紫外线照射无法使得培养基中的病毒粒子完全灭活;该病毒对氯仿、胰蛋白酶较为敏感,二者均可使病毒滴度下降;在适应的条件下,重组鸡痘病毒r FPVHg-Hp对超声波具有一定的耐受性。