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本研究旨为克隆鸡氨肽酶N(chAPN)基因,高效表达可溶性目的蛋白,并测定其生物学功能。应用RT-PCR方法从鸡胚肾细胞中克隆chAPN的基因片段,经测序鉴定后再克隆至原核表达载体pCOLD-TF,构建重组原核表达质粒pCOLD-TF-chAPN,在大肠杆菌BL21(DE3)中经不同条件诱导表达目的蛋白;利用镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;Leu-PNA酶促反应和ELISA等方法检测目的蛋白生物学功能。结果显示,重组质粒pCOLD-TF-chAPN在大肠杆菌中以可溶形式高效表达;酶促反应及ELISA结果显示该蛋白具有酶活性,可结合传染性支气管炎病毒(IBV),并表现为剂量依赖性。这为今后研究chAPN的酶活性、作为IBV受体及抗病毒功能奠定了实验基础。 相似文献
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伪蝎生物学 总被引:1,自引:0,他引:1
Peter Weygoldt(1969)编写出版了伪蝎生物学,内容丰富翔实,包括外部形态、内部解剖学与生理学、运动与一般行为、生殖与发育、胚胎后发育和蜕皮、寿命与衰老、生态学以及进化与分类系统学等,并附有大量的精细插图.本书侧重的是伪蝎生物学,附带了极少的进化与分类系统,但与当前的进化研究与分类系统相比,内容已显陈旧(如当时世界伪蝎种数1500,现已知3385).本书自出版至今没有再版.我国对伪蝎目动物无论是生物学还是分类学均了解甚少.在国家自然基金委资助下,我国于今年已启动伪蝎目分类项目.为了促进我国伪蝎研究,引发对伪蝎的兴趣,我们翻译了本书.为体现近年世界对伪蝎的研究进展,我们增加了序的内容. 相似文献
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牛病毒性腹泻病毒NS3基因的序列分析、表达与抗原性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究应用套式RT-PCR方法扩增出牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株编码NS3蛋白的基因,克隆至表达载体pET-30a(+),并进行测序。对瘟病毒属病毒NS3基因进行氨基酸差异性分析,显示平均P-distance为0.07,系统进化树分析表明VEDEVAC株隶属于BVDV1型。将构建成功的重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta(DE3),在IPTG诱导下表达NS3重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化和尿素梯度透析后进行反应原性鉴定。Western blotting结果显示表达的重组蛋白可以与牛病毒性腹泻病毒阳性血清反应,并与猪瘟阳性血清有交叉反应,ELISA结果显示该重组蛋白具有良好的反应原性。所获得的蛋白为建立针对NS3抗体的ELISA检测方法奠定了基础。 相似文献
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