解脲脲原体UPA3-0382基因原核表达载体的构建与表达分析

为了探讨解脲脲原体UPA3-0382基因的功能,该研究构建了解脲脲原体UPA3-0382基因的原核表达载体,并对其表达蛋白进行了初步的生物信息学分析。首先,利用PCR方法克隆得到624 bp的UPA3-0382基因,使用限制性内切酶Bam H I和Not I酶切目的基因和质粒p GEX-6P-2,并用T4连接酶连接后转化入大肠埃希菌感受态XL1-Blue中,并诱导表达蛋白,而后运用生物信息学软件分析编码蛋白的结构及功能。结果显示,克隆出的UPA3-0382基因测序结果经Blast比对显示同源性为100%,表达出分子量约为50 k Da的GST-UPA3-0382融合蛋白,大小与预期一致,经生物信息学软件分析该蛋白由207个氨基酸组成,分子式为C1075H1749N305O348S3,分子量为24.62 k Da,理论等电点为6.40。二级结构中含有α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规则卷曲,比例分别为48.79%、16.91%、7.25%和27.05%,无信号肽及跨膜区域,蛋白质空间结构及功能预测显示,该蛋白为假设蛋白,推测其可能参与了解脲脲原体信号转导与能量代谢等作用,为进一步研究解脲脲原体奠定了基础。