von Hippel-Lindau病的分子机制研究

VHL病(Von Hippel-Lindau disease)是一种遗传性肿瘤综合征,由VHL抑癌基因突变引起.研究表明,VHL蛋白在体内具有多种功能,VHL基因突变形式和部位的差异所造成的VHL蛋白功能增加、减少或缺失可能是导致肿瘤不同表型的重要原因.     

鼠源性人乳腺癌单链抗体库的构建与乳腺癌相关抗体的筛选

目的:获得乳腺癌的噬菌体呈现型单链抗体(scFv)库,筛选与乳腺癌细胞特异结合的抗体,为乳腺癌的诊断和治疗奠定基础。方法:用乳腺癌细胞系MCF-7、T47D、MDA-MB-435免疫BALB/c小鼠,取脾脏提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区(VH和VL)基因,经Linker连接形成scFv基因片段。将scFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化大肠杆菌TG1。用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,获得重组噬菌体抗体。选用乳腺癌细胞系MCF-7和人正常肝细胞系HL02做正负差异的筛选细胞,通过5轮筛选,随机挑取克隆,经phage-ELISA筛选特异性结合MCF-7细胞的scFv。结果:构建了1个库容为1.3×106的单链抗体库。筛选到2株与MCF-7细胞有较高结合活性的噬菌体-单链抗体scFv-873和scFv-874。数据库搜索表明这2株单链抗体基因是与以往抗体序列不同的新基因。用Westernblot检测了这2株单链抗体在琥珀密码子非抑制型菌株TOP10中的表达情况。结论:筛选到2个与乳腺癌细胞结合特异性较好的单链抗体,为乳腺癌的诊断和治疗研究奠定了基础。     

罗氏沼虾蜕皮激素受体EcR基因的克隆及表达分析

为获得罗氏沼虾蜕皮激素受体(ecdysone receptor, EcR)基因编码序列,并检测mRNA表达模式。本实验拟利用克隆测序技术,以肝胰腺为实验素材,扩增EcR基因的编码区;借助生物信息学手段对所得序列进行分析;采用实时荧光定量PCR技术检测EcR基因在肌肉和肝胰腺等8个组织中的m RNA表达量。结果表明,罗氏沼虾EcR基因的编码区长度为1 716 bp,共编码571个氨基酸。物种间同源性比较分析发现,罗氏沼虾EcR基因序列与褐虾、黑背陆地蟹、日本沼虾、美洲龙螯虾、大西洋砂招潮蟹、蓝蟹、三疣梭子蟹、中华绒螯蟹和拟穴青蟹的同源性分别为90.7%、84.1%、83%、81%、81%、80.6%、79.8%、77.2%和75.9%。组织表达谱结果显示,EcR基因在所检8种组织中广泛表达,且不同性别相同组织间和相同性别不同组织间EcR的表达均存在不同程度的差异性。其中EcR基因在雄虾的鳃组织中表达量最高,在肌肉组织表达量最低;在雌虾的卵巢组织中高表达,在腹节神经组织中低表达。此外,EcR基因在雌虾的性腺、肠和肝胰腺组织中的表达量极显著或显著高于雄虾(p0.01或p0.05),在鳃组织中极显著低于雄虾(p0.01)。本研究成功克隆了罗氏沼虾的EcR基因,检测到EcR基因在各组织中广泛表达,且在不同性别相同组织和相同性别不同组织中存在显著差异。本实验为进一步研究EcR基因与生长发育调控作用提供了理论依据。     

东海赤潮高发区春季叶绿素a和初级生产力的分布特征

2002年4-5月对东海海域进行了综合调查,分析了海区叶绿素a和初级生产力的分布特性．结果表明,大面站表层平均叶绿素a浓度为1．086mg·m-3．分级叶绿素a结果显示．春季东海浮游植物以微型和微微型(<20μm)占优势,其对海区叶绿素a的贡献为64％,超微型浮游植物(<5μm)占浮游植物生物量的27％．营养盐分布和浮游动物的摄食压力影响了叶绿素a及其粒级结构的分布．平均初级生产力为10．091mg·m-3·h-1。赤潮跟踪的R-03、RL-01、RG-01站的平均初级生产力为399．984mg·m-3·h-1．光和营养盐成为叶绿素和初级生产力平面分布的主要限制因子．表层叶绿素a和初级生产力均在调查海区的123·E纵断面冲淡区产生高值区．DC-11站浮游植物生物量异常高,表层叶绿素a达到9．082mg·m-3,初级生产力为128．79mg·m-3·h-1．但并未出现水色异常．     

紫外辐射对两种海洋微藻生长及培养体系碳流的影响

以硅藻威氏海链藻(Thalassiosira weissflogii)和甲藻锥状斯氏藻(Scrippsiella trochoidea)为实验材料, 通过室内模拟华南地区秋季晴天紫外辐照强度, 研究两种不同波段的紫外辐射(Ultraviolet radiation, UVR)对两种微藻生长以及培养体系碳流的影响。结果表明: UV-A 对两种微藻的生长有显著的促进作用, 而UV-B 则表现为抑制作用。锥状斯氏藻对UV-B 的耐受性更强。在UV-A 的作用下, 培养体系中溶解无机碳(Dissolved inorganic carbon, DIC)的净消耗量低于对照组, 但释放出更多的溶解有机碳(Dissolved organic carbon, DOC)。对照组的有色溶解有机物(Chromophoric dissolved organic matter, CDOM)含量显著升高, 表明浮游植物生长过程是CDOM的来源之一。然而, 在UV-A的作用下, 两种微藻培养体系的CDOM浓度变化呈现相反趋势, 说明不同藻种的CDOM 产物受光漂白和光腐殖化的影响不同。在UV-B 的作用下, 微藻碎屑的分解使水体DIC 和DOC 浓度轻微升高。总体上, 锥状斯氏藻比威氏海链藻净释放出更多的DOC 和CDOM。