| 鼠源性人乳腺癌单链抗体库的构建与乳腺癌相关抗体的筛选 |
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| 引用本文： | 袁翔,胡宝成.鼠源性人乳腺癌单链抗体库的构建与乳腺癌相关抗体的筛选[J].生物技术通讯,2006,17(1):1-4. |
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| 作者姓名： | 袁翔 胡宝成 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30271458) |
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| 摘 要： | 目的:获得乳腺癌的噬菌体呈现型单链抗体(scFv)库,筛选与乳腺癌细胞特异结合的抗体,为乳腺癌的诊断和治疗奠定基础。方法:用乳腺癌细胞系MCF-7、T47D、MDA-MB-435免疫BALB/c小鼠,取脾脏提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区(VH和VL)基因,经Linker连接形成scFv基因片段。将scFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化大肠杆菌TG1。用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,获得重组噬菌体抗体。选用乳腺癌细胞系MCF-7和人正常肝细胞系HL02做正负差异的筛选细胞,通过5轮筛选,随机挑取克隆,经phage-ELISA筛选特异性结合MCF-7细胞的scFv。结果:构建了1个库容为1.3×106的单链抗体库。筛选到2株与MCF-7细胞有较高结合活性的噬菌体-单链抗体scFv-873和scFv-874。数据库搜索表明这2株单链抗体基因是与以往抗体序列不同的新基因。用Westernblot检测了这2株单链抗体在琥珀密码子非抑制型菌株TOP10中的表达情况。结论:筛选到2个与乳腺癌细胞结合特异性较好的单链抗体,为乳腺癌的诊断和治疗研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 单链抗体库 噬菌体展示 乳腺癌 筛选 |
| 文章编号： | 1009-0002（2006）01-0001-04 |
| 收稿时间： | 2005-06-21 |
| 修稿时间： | 2005年6月21日 |
Construction of scFv Library with Human Breast Cancer from Immunised Mice and Screening Antibodies Binding to Breast Cancer |
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| YUAN Xiang,HU Bao-cheng.Construction of scFv Library with Human Breast Cancer from Immunised Mice and Screening Antibodies Binding to Breast Cancer[J].Letters in Biotechnology,2006,17(1):1-4. |
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| Authors: | YUAN Xiang HU Bao-cheng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | scFv library phage display breast cancer selection |
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