Memo蛋白的融合表达和纯化

目的:一些临床预后较差的恶性肿瘤一般具有很高的转移性和侵袭性,近来的研究表明,Memo蛋白与恶性肿瘤的这些特性有十分密切的关系。本研究拟克隆、融合表达和纯化Memo蛋白。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增Memo蛋白编码序列,并将其以正确相位与pGST载体中的GST编码序列融合,构建成重组质粒pGST-Memo。将此重组质粒转化大肠杆菌DH5α后,用谷胱甘肽-Sepharose4B纯化融合蛋白,并用Western印迹检测融合蛋白的表达。结果:构建了Memo蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌DH5α中得到表达,经谷胱甘肽-Sepharose4B亲和层析获得了纯化的GST-Memo融合蛋白。Western印迹检测表明,此蛋白可与GST抗体反应。结论:Memo蛋白的克隆、融合表达和纯化,为进一步研究恶性肿瘤的转移性、侵袭性及其相关机理提供了有用的材料。     

癌基因MDM2对雌激素受体转录活性的调节作用

目的:检测MDM2基因对雌激素受体α和β(ERα和ERβ)是否具有转录活性调节作用。方法:用PCR方法从乳腺文库中扩增MDM2序列,并将其以正确相位与pcDNA3-FLAG载体中的FLAG序列融合,构建成重组质粒pcDNA3-FLAG-MDM2;以含雌激素反应元件的荧光素酶(ERE-LUC)为报告基因,通过检测荧光素酶活性来确定MDM2是否对ER有转录调节因子的作用。结果:克隆和表达了MDM2基因;MDM2只对ERα具有转录活性调节作用。结论:MDM2对ER转录活性的调节具有亚型特异性。     

HIV—1 env基因在鸡痘病毒中表达的研究

HIV是Alffi的主要病原,其env基因编码的病毒粒子外膜蛋白gpl60可被宿本细胞蛋白分解酶修饰加工成膜表面蛋白（gP120）和穿胰蛋白（MI）。gP160上含有多个HfV感染的中和部位,已证明envgP160和gP120能诱导机体产生中和抗体和CYL反应,成为基因工程疫苗研究的重点。我舍已完成鸡瘟病毒（FI,v）282M株基因组BamHI片段的克隆和分析。本实验即是利用核病的TK和B片段,插入痘苗病毒P7．5多个串联的启动干和牛瘟病毒A型包涵体（ATI）的晚期启动手的复合启动子,以beZ做报告基因,构建IZ个命名为puTA—Zf－16L和PuBA－7－16L的载…