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人血小板生成素全长分子在酵母系统中的分泌表达及活性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母(Pichiapastoris)染色体上,获得遗传性稳定分泌表达株.利用酵母信号肽MFα,对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计,使天然人TPO成熟肽在毕赤酵母系统中分泌表达成功.表达产物经Western-blot进行分析,分子量约为66kD处蛋白条带可被TPO抗体识别;表达量约为0.1g/L;N端氨基酸序列分析结果与设计的一致;表达产物对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位(megakary-ocytecolonyformingunit,CFU-Meg)具有明显的刺激作用. 相似文献
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为了探讨血小板生成素(TPO)糖基化与其生物半衰期的关系,首先纯化了巴氏毕赤酵母系统分泌表达的人TPO成熟肽和大肠杆菌表达的人TPON端结构域蛋白.纯化产物经Westernblot鉴定和活性分析后,两种蛋白以相同浓度或相同活性单位给Wister大鼠尾静脉注射,利用酶联免疫分析(ELISA)和TF1细胞测定不同时间点实验动物血浆中TPO浓度或生物学活性,求出两种TPO的生物半衰期(t1/2)值.结果显示,以相同浓度和相同活性单位给药,TPO成熟肽的t1/2均比其N端结构域的长,前者分别是后者的1.65倍和1.27倍. 相似文献
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在利用反转录-PCR从人胎肝中获得编码人血小板生成素(hTPO)全长cD-NA的基础上,综合TPO结构与功能的研究信息,在大肠杆菌中表达了成熟肽N端结构域.目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的30%;包涵体经变性、复性、凝胶过滤、离子交换层析等步骤处理后,所得产物给Babl/c小鼠腹腔连续注射8d,第9d摘眼球采血,计数血小板的数量.结果表明,TPON端结构域具有明显促进血小板生成的作用. 相似文献
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