不同病区血培养病原菌分布及耐药性分析

目的 了解各病区血培养分离病原菌的分布特点及其耐药性,指导临床医生合理有效地使用抗生素.方法 对宁波市泌尿肾病医院·鄞州第二医院2008年8月至2011年7月临床送检的8409例血液标本经Bact/A-lert3D全自动血培养仪培养,分离所得菌用美国德灵公司Walkaway 40系统进行鉴定和药敏.对检测结果进行统计学分析.结果 共检出病原菌853株,其中革兰阴性杆菌422株,革兰阳性球菌396株,真菌35株.血浆凝固酶阴性葡萄球菌占首位,其次分别为大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌.检出菌数量居前三位的病区是重症监护病房、消化内科及肾内科.各病区的病原菌分布不尽相同.丁胺卡那、亚胺培南对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌显示出较高的敏感性,未发现耐利奈唑胺及万古霉素菌株.结论 该院血流感染病原菌以革兰阴性杆菌为主,各主要病区病原菌分布不尽相同,临床医生应跟据药敏结果合理有效地使用抗生素.     

“环境污染的生物修复”课程教学改革探索与实践

“环境污染的生物修复(Bioremediation of Environmental Pollution)”是环境科学、环境工程、农业资源与环境等专业的专业选修课,在专业人才培养体系中具有重要地位。针对课程前期教学中存在的问题,任课教师结合高质量人才培养需求,从课程教学目标优化、课程教学内容重构与知识整合、教学方法改革与创新等环节对课程教学进行了改革探索。实践结果表明,改革后的课程教学不仅显著提升了课程教学目标的达成度,还有效提高了学生自主学习能力、思维能力和知识综合运用能力,取得了较好的教学效果。     

东海赤潮高发区沉积物中叶绿素的分析

研究分析了2002年8～9月“赤潮973”航次所采集的沉积物中叶绿素a及其降解产物脱镁叶绿酸含量与分布．结果表明。叶绿素a和脱镁叶绿酸是同源的;随深度增加叶绿素a和脱镁叶绿酸的含量呈递减趋势,到一定深度后含量不再变化。个别站位叶绿素a和脱镁叶绿酸的垂直分布出现了许多小突跃,可能是由生物扰动引起;表层沉积物(0～0．5cm)中的叶绿素a和脱镁叶绿酸的变化幅度分别为0．14～1．17和0．83～5．58μg·g-1。平均值分别为0．54和2．45μg·g-1;并初步探讨水深(光强)、盐度、温度、含水量对叶绿素水平分布的影响;脱镁叶绿酸作为叶绿素的主要降解产物,到一定深度后,成为叶绿素的主要存在形式,约占80％～90％;由于水温的不同,夏季沉积物中的叶绿素a和脱镁叶绿酸含量是春季的3倍之多;比较了上层水柱中的叶绿素和沉积物中的叶绿素的相对含量,平均而言,沉积物中叶绿素占上层水柱中叶绿素的31％．     

植物源内含子对GUS基因表达模式的影响

采用报告基因的瞬间表达来优化转化体系是提高农杆菌介导法转化效率的重要手段,GUS以稳定、易于定性定量分析等独特优点成为瞬间表达体系的首选。pCaMV 35S启动下的GUS基因可在农杆菌中表达,另外还首次报道该嵌合基因同时也可在大肠杆菌中高效表达。为避免GUS基因在农杆菌中的表达对瞬间表达体系的影响,一拟南芥蛋白基因的内含子被插入到GUS基因的编码区,进而构建了含内含子的GUS植物表达载体pBI121-GUSint。组织化学染色结果表明,GUSint在农杆菌中没有表达,而在接种3d的油菜中可高效瞬间表达,其中在子叶柄（带子叶）中瞬间表达率高达100%,这一方面证实载体构建成功,另一方面也为进一步优化油菜及其它芸薹属植物转化体系及在油菜中快速研究目的基因的功能和表达调控模式奠定了基础。     

基于连接酶—ELISA反应的单核苷酸多态性分型新方法

随着大量与人类疾病和药物治疗相关的单核苷酸多态性（Single-nucleotide polymorphism,SNP）的发现,出现了多种SNP分型检测的方法和技术。然而,大多数方法由于受限于检测灵敏度低或对检测设备和实验条件要求较高,不适宜于在一般实验条件下进行常规临床检测。通过建立一种基于连接酶-ELISA的SNP快速分型新方法,以非小细胞肺癌个体化治疗中,酪氨酸激酶抑制剂药物的生物标记基因—表皮生长因子受体基因（EGFR）为检测对象,对EGFR,c.2573T〉G（L858R）,EGFR,c.2582T〉A（L861Q）和EGFR,c.2155 G〉T（G719C）3个SNP位点进行了突变检测。经过18~28个循环的PCR扩增,能够通过琼脂糖凝胶电泳和ELISA反应,根据电泳条带的有无和ELISA显色值清晰判断检测位点的基因型,并且能够从混合等位基因样本中检测出5%的突变型等位基因。结果表明,方法具有较高的特异性和灵敏度,适合于在常规实验条件下从不均一的样本中进行突变等位基因的检测。     

SPARC基因敲除小鼠的繁育及子代基因型的鉴定

目的:探讨富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白(SPARC)基因敲除小鼠的繁殖和鉴定方法,为进一步研究SPARC蛋白的功能奠定基础。方法:将所引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,繁殖成功后其子代中将会出现野生型、杂合子以及纯合子3种基因型。提取子鼠鼠尾基因组DNA,用PCR法扩增SPARC和Neo基因片段,通过限制性内切酶酶切反应,证实PCR扩增产物的正确性;应用Westernblot检测SPARC蛋白质的表达,进一步证实PCR鉴定方法的可靠性。结果:SPARC基因杂合子小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,SPARC基因缺失纯合子小鼠有繁殖能力。琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR产物分子量大小与预期的目的基因片段相对分子质量大小一致,酶切和Westernblot结果证实PCR结果可靠。结论:PCR方法能够准确鉴定SPARC基因突变小鼠基因型。     

沼泽红假单胞菌对亚硒酸盐还原脱毒的研究

主要研究沼泽红假单胞菌对亚硒酸盐还原脱毒作用及其脱毒机理。通过单因子实验、正交试验, 对影响亚硒酸盐还原脱毒的因素进行研究, 得到沼泽红假单胞菌还原亚硒酸盐的最佳条件为: 亚硒酸钠添加量是25 mg/L, 培养的第5天接种接种量15% (质量比)。在该条件下, 对亚硒酸钠去除率可达98.2%。研究发现, 亚硒酸盐还原酶主要存在于细胞质, 分子量约为182 kD, 由4个亚基组成。通过透射电子显微镜观察, 菌体表面出现粒径在5 nm?200 nm之间的高电子密度颗粒, 初步表明亚硒酸盐在沼泽红假单胞菌体内被     

过表达Nogo-C对PC12细胞存活及增殖的影响

以PC12细胞为神经元细胞模型,研究Nogo-C对神经元细胞存活及增殖的作用。在PC12细胞中转染过表达Nogo-C,使用G418药物筛选以获得稳定表达的细胞克隆,利用Hoechst33342染色、细胞计数、MTT以及流式细胞仪等技术检测Nogo-C对细胞增殖以及细胞周期的影响。结果表明:(1)Hoechst33342染色未观察到表达Nogo-C的细胞发生明显凋亡;(2)细胞计数及MTT实验观察到转染Nogo-C后的PC12细胞生长增殖活性明显降低;(3)流式细胞仪检测细胞生长周期,正常PC12细胞G1期的百分数为(37.8±7.9)%,S期为(50.4±8.5)%,而转染Nogo-C的PC12细胞G1期为(76.8±4.1)%,S期为(14.7±1.7)%,提示转染Nogo-C的PC12细胞的细胞周期被阻滞在G1期;(4)没有获得稳定表达Nogo-C的PC12细胞模型。实验证明,过表达Nogo-C通过使PC12细胞周期被阻滞在G1期而明显抑制细胞的增殖,但是并不引起细胞的凋亡。     

单核苷酸多态性检测方法研究进展

：单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism,SNP）是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异引起的一种DNA序列多态性。SNP作为第三代分子标记,具有数量多、分布广等特点,已成为人类后基因组时代的主要研究内容之一。单核苷酸多态性在医学研究、临床诊断、药物开发与合理用药、法医学、遗传学的发展方面具有重要意义。因此,建立高度自动化和高通量的SNP检测分析技术十分重要。各种SNP分型检测方法都由等位基因特异性的识别反应和等住基因识别产物的分析检测两个部分组成。本文系统的介绍了引物延伸反应、序列杂交反应、酶连接反应、酶切割反应、核酸链构象差异反应等SNP检测的等位基因特异性的识别原理,以及质谱、荧光共振和偏振信号、化学发光、毛细管电泳测序、生物传感器等分析检测手段,并简要介绍了相关识别原理和分析检测手段的优缺点及应用范围,并对SNP检测技术的发展进行了展望。     

井冈蜜柚果汁饮料的研制

通过正交试验探讨井冈蜜柚果汁饮料加工中果汁提取、脱苦、风味调配和稳定性问题,结果表明：采用1 000U/100g果胶酶和200U/100g纤维素酶的复合酶在45℃酶解3 h可以提高出汁率;加入0.2%的CMC 可有效防止果汁出现分层;产品中白砂糖量为10%、柠檬酸0.2%、糖酸比26.4∶1,此时的口感风味最佳。