重组腺相关病毒包装容量研究进展

在以病毒载体介导的基因治疗研究中,重组腺相关病毒(rAAV)因其疗效和安全性方面的优势,是最有临床应用前景的载体。但其转基因包装容量一般不能超过5.0kb,给需要转导大片段基因的应用带来了困难,限制了rAAV在基因治疗研究中的应用。随着对rAAV细胞转导生物学过程研究的不断深入,发现了一些可以突破rAAV包装容量限制的技术,如反式剪接和同源重组策略,为拓展该载体应用范围提供了可能性。另外,rAAV包装容量限制的特点还可以被用来减少生产过程中具有可复制能力的类病毒杂质的污染,为rAAV的临床安全性提供了保障。     

重组腺相关病毒规模化生物包装技术

重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV)的诸多优点使其成为具有巨大潜力的人类基因治疗载体。人类基因治疗临床前和临床研究以及基因治疗产品的市场化要求rAAV载体生产的规模化。自1989年野生型的腺相关病毒序列被Samulski报道以来,rAAV的生产工艺已经从传统的质粒共转染发展到应用包装细胞系和生产细胞系,包装细胞也从"人体细胞"衍化到"昆虫细胞"。目前rAAV的生产规模和病毒载体质量都完全可以符合临床应用要求,有效地促进rAAV在基因治疗临床上的广泛运用。以下将着重介绍rAAV规模化生物包装技术的发展趋势,尤其各种规模化生产系统的要点。     

血清白细胞介素6、脑源性神经营养因子、甘油三酯、5-羟色胺与精神分裂症患者认知功能和攻击行为的关系分析

摘要 目的：探讨血清白细胞介素6（IL-6）、脑源性神经营养因子（BDNF）、甘油三酯（TG）、5-羟色胺（5-HT）与精神分裂症（SZ）患者认知功能的关系,并分析SZ患者攻击行为的影响因素,研究血清IL-6、TG、BDNF、5-HT与攻击行为的关系。方法：选取2020年1月～2022年1月我院收治的112例SZ患者作为SZ组,根据有无攻击行为分为有攻击行为组31例和无攻击行为组81例,另选取同期41例体检健康者作为对照组,检测血清IL-6、BDNF、TG、5-HT水平,中文版MATRICS共识认知成套测验（MCCB）评估认知功能。采用Pearson/Spearman相关性分析SZ患者血清IL-6、BDNF、TG、5-HT水平与MCCB评分的相关性,多因素Logistic回归分析SZ患者攻击行为的影响因素,受试者工作特征（ROC）曲线分析血清IL-6、BDNF、TG、5-HT水平对SZ患者攻击行为的预测价值。结果：SZ组血清IL-6、TG水平高于对照组,BDNF、5-HT水平和MCCB评分低于对照组（P＜0.05）。Pearson/Spearman相关性分析显示,SZ患者血清IL-6、TG水平与MCCB评分呈负相关（r/rs=-0.569、-0.528,均P＜0.001）,BDNF、5-HT水平与MCCB评分呈正相关（r/rs=0.587、0.602,均P＜0.001）。多因素Logistic回归分析显示,PANSS总分增加（OR=1.958,95％CI：1.035～3.704）、IL-6升高（OR=1.015,95％CI：1.041～1.172）、TG升高（OR=1.007,95％CI：1.023～1.135）为SZ患者攻击行为的独立危险因素,MCCB评分增加（OR=0.911,95％CI：0.848～0.979）、BDNF升高（OR=0.792,95％CI：0.656～0.955）、5-HT升高（OR=0.979,95％CI：0.965～0.994）为独立保护因素（均P＜0.05）。ROC曲线分析发现,血清IL-6、BDNF、TG、5-HT水平单独与联合预测SZ患者攻击行为的曲线下面积（AUC）分别为0.765、0.754、0.750、0.748、0.920,四项联合预测SZ患者攻击行为的AUC大于各指标单独预测。结论：SZ患者血清IL-6、TG水平升高和BDNF、5-HT水平降低与认知功能障碍和攻击行为有关,血清IL-6、BDNF、TG、5-HT水平可作为SZ患者攻击行为的辅助预测指标。     

重组腺相关病毒载体临床实验研究

重组腺相关病毒载体 (rAAV)基因药物已经开展六十余项（67）临床研究,其安全、高效、稳定、表达持久等特点越来越受到业界的重视,最近的临床试验发现其在治疗先天性黑内障临床研究中呈现出显著疗效更是极大地振奋了人们的信心。临床研究案例的增加使人们对rAAV基因药物有了更为全面、深入的认识。与此同时,也对基因药物提出了更多挑战与要求,尤其是免疫原性和安全性等方面。     

真核蛋白质的亚细胞位点预测研究进展

研究真核蛋白质的亚细胞位点是了解真核蛋白质功能,深入研究蛋白质相关信号通路内在机制的基础。同时,可以为了解 疾病发病机制及为新药研发提供帮助。因此,研究真核蛋白质的亚细胞位点意义十分重大。随着基因组测序的完成,真核蛋白质 序列信息增长迅速,为真核蛋白质亚细胞位点的研究提出了更多的挑战。传统的实验法难以满足蛋白质信息量迅速增长的需求。 而采用生物信息学手段处理大规模数据的计算预测方法,可在较短时间内获得大量真核蛋白质亚细胞位点信息,弥补了实验法 的不足。因此,运用计算预测法预测真核蛋白质的亚细胞位点成为生物信息学领域的研究热点之一。本文主要从提取真核蛋白质 的特征信息、计算预测方法及预测效果的评价三个方面,介绍近年来真核蛋白质亚细胞位点预测的研究进展。     

重组腺相关病毒载体相关性杂质

可以稳定表达治疗基因而无明显不良反应的重组腺相关病毒 (rAAV) 载体被认为是最有发展前景的基因治疗载体。但如何建立可以有效去除rAAV载体内具有潜在致病危害的杂质、产品质量符合临床使用要求的纯化工艺是研究人员面临的巨大挑战。其中针对载体相关性杂质的纯化工艺尤为关键,因为该类杂质的性质与真正的rAAV载体极其相似,一旦存在便难以去除,且会引起严重不良反应。以下总结了该类杂质形成的过程及有别于rAAV载体的特点,并对可以防止其生成或将其与rAAV载体有效分离的技术手段进行了评价。     

自身互补型腺相关病毒载体发展趋势

重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV)可以作为基因运载工具将目的基因运送入靶器官并对多种疾病发挥治疗作用。以rAAV为载体进行基因治疗的关键是病毒基因组由单链变为双链,否则不能适时、有效表达目的基因。自身互补型rAAV(scrAAV)载体基因组本身以双链形式存在,与常规的单链rAAV(ssrAAV)载体相比,无论在表达时间还是表达强度上都有十分明显改善,可显著降低在疾病治疗过程中由于载体本身所诱发的免疫反应。目前,scrAAV已经在肝脏疾病、中枢神经系统疾病、眼部疾病、干细胞修饰以及RNA干扰、核酶技术等领域得到应用。以下在介绍scrAAV载体构建、表达、定位的基础上,以血友病B为主要对象,阐述scrAAV的应用潜力及发展趋势。