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研究民族药烟管头草粗提物对体外前列腺增生(BPH1)细胞增殖的影响及对前列腺增生细胞生长的调控机制。荧光倒置显微镜观察实验组细胞数量与状态明显改变,且有凋亡小体出现现象; MTT法检测烟管头草粗提物对前列腺增殖细胞增殖作用实验表明,粗提物对BPH1细胞有很好抑制作用; Transwell侵袭实验表明细胞侵袭潜能随药物浓度增大而降低;细胞凋亡-Heston染色试剂检测粗提物对细胞凋亡的影响,表明粗提物与诱导细胞凋亡相关;细胞凋亡-DNA ladder抽提试剂盒检测DNA变化实验证实细胞经药物作用呈现典型的梯状条带;分子生物学实验进一步证明,细胞凋亡可能与Wnt信号通路的基因表达有关。 相似文献
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着色性干皮病F蛋白 (xeroderma pigmentosum group F, XPF) 和切除修复交叉互补组1蛋白 (excision repair cross complementing group 1, ERCC1) 组成一种结构特异性的核酸内切酶 (XPF-ERCC1)复合物,参与DNA链间交联 (interstrand crosslink, ICL) 损伤修复。其中,XPF蛋白的去泛素化修饰对DNA损伤修复的影响尚未见报道。本工作主要研究泛素特异性蛋白酶15 (ubiquitin-specific protease 15, USP15) 对XPF的稳定性及ICL修复的影响。本研究通过蛋白质质谱和Western印迹法分析发现,XPF蛋白与USP15存在相互作用,进而使XPF蛋白去泛素化修饰;采用CRISPR-Cas9技术构建USP15基因敲除的HeLa细胞株 (USP15 KO) 并进行Western印迹分析,结果显示,敲除组XPF蛋白水平低于对照组 (P<0.001)。克隆形成试验显示,在ICL诱导剂顺铂 (cisplatin,DDP) 和丝裂霉素C (mitomycin, MMC) 的作用下,USP15基因敲除的HeLa细胞增殖能力显著降低 (P<0.01)。本研究表明,去泛素化酶USP15是一种重要的DNA修复调节因子,该酶通过稳定XPF蛋白促进由XPF-ERCC1介导的ICL修复。本研究为改善ICL诱导剂类抗癌药物的耐药性提供了理论依据,并为肿瘤的治疗提供了潜在的新靶点。 相似文献
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