脂肪来源干细胞通过Wnt/β-catenin通路调控前列腺增生上皮BPH-1细胞的增殖和凋亡

为了探讨脂肪来源干细胞对前列腺增生上皮BPH-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究从人体脂肪组织中分离脂肪来源干细胞并通过流式细胞术鉴定细胞表面标志物,将实验分为2组:对照组和脂肪来源干细胞共培养组。采用Transwell进行共培养,脂肪干细胞与前列腺增生上皮BPH-1细胞共培养组中两者比例为1:1,对照组中不含脂肪干细胞。CCK8检测前列腺增生上皮BPH-1细胞活力;羟脯氨酸法检测前列腺增生上皮细胞胶原合成能力;流式检测前列腺增生上皮细胞凋亡率;Western blotting检测前列腺增生上皮细胞Wnt3a、Bcl2和β-catenin蛋白表达水平。流式细胞仪检测结果,显示酶消化法能够从脂肪组织中分离出脂肪干细胞。人脂肪来源干细胞与前列腺增生上皮BPH-1细胞共培养能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞的增殖能力,羟脯氨酸检测结果表明,脂肪干细胞能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞胶原合成,流式检测结果显示脂肪干细胞能够显著促进前列腺增生上皮BPH-1细胞的凋亡,Western blotting检测显示脂肪干细胞能够显著抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞Wnt3a、Bcl2和β-catenin蛋白表达。本研究的初步结论表明:脂肪来源干细胞通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制前列腺增生上皮BPH-1细胞增殖。     

绿原酸对人骨肉瘤MG63细胞生物学行为的影响

目的:探讨绿原酸对人骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响。方法:采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,细胞侵袭实验(Transwell)及细胞划痕实验检测细胞侵袭性及迁移性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞干性基因及凋亡相关基因,凋亡试剂盒检测细胞凋亡比例。结果:在100μg/mL绿原酸干预的实验组中MG63细胞增殖减慢,细胞干性基因较对照组表达降低,侵袭性及迁移性经绿原酸处理后也相应降低,抗凋亡基因Bcl-2表达下降,细胞凋亡比例增加。结论:绿原酸对MG63人骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移具有抑制作用并促进MG63细胞的凋亡,有望成为治疗骨肉瘤的有效药物。     

三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用及其FOXO1表达的影响

本研究探讨三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的生长及迁移等作用的抑制作用以及对FOXO1的表达的影响。不同浓度三氧化二砷作用人乳腺癌MCF-7细胞后,利用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡的变化;通过划痕实验和transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化;通过荧光定量PCR和Western blotting检测FOXO1基因和蛋白水平表达的变化。结果显示不同浓度的三氧化二砷能够抑制细胞生长、迁移及侵袭,诱导细胞发生凋亡,且具有浓度依赖性;并且三氧化二砷可以上调FOXO1基因和蛋白水平的表达。因此三氧化二砷对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用可能与上调抑癌基因FOXO1表达有关。     

不同剂量柚皮素对FADU细胞生长的调节及机制研究

目的:探究不同剂量柚皮素(naringenin)对人下咽癌FADU细胞的作用及其相关机制。方法:以不同剂量(0、100、200、400、800μg/m L)柚皮素对FADU细胞进行处理,倒置显微镜观察细胞形态学变化;cck-8法检测药物作用后不同时间(24、48、72 h)FADU细胞增殖的变化;流式细胞仪检测柚皮素作用48 h细胞凋亡的变化;采用Transwell趋化小室体外侵袭实验测定48 h后细胞的侵袭能力的变化;蛋白免疫印迹法检测48 h后细胞内PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达的影响。结果:cck-8法检测发现柚皮素抑制FADU细胞增殖作用明显,呈浓度和时间依赖性;流式细胞结果发现200,400,800μg/m L柚皮素作用48 h后,FADU细胞的凋亡率显著增高,差异有统计学意义(P0.05)。Transwell体外侵袭实验发现,随着柚皮素浓度增加,FADU细胞穿透聚碳酸酯滤膜的能力逐渐减弱,柚皮素有效的抑制FADU细胞在体外的侵袭能力,呈浓度依赖性。同时,蛋白免疫印迹法凋亡相关蛋白检测结果表明,FADU细胞内BCL2、P-AKT和P-PI3K蛋白表达均受到明显抑制。结论:柚皮素能有效抑制人下咽癌FADU细胞的增殖、体外侵袭能力,诱导细胞凋亡;其机制与下调PI3K/AKT信号通路凋亡相关蛋白表达有关。     

U0126通过下调p-ERK1/2和GM130的表达对人胃癌细胞MKN-45的影响

探讨ERK1/2通路抑制剂U0126对人胃癌MKN-45细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响及机制。首先用CCK-8法测定U0126对MKN-45细胞增殖的影响并筛选药物作用的最适浓度和时间用于后续实验,并将实验分为药物处理组,阴性对照组和空白对照组。然后通过流式细胞术、Transwell迁移实验和Matrigel侵袭实验分别检测细胞凋亡、迁移和侵袭能力,RT-q PCR检测各组GM130的m RNA水平的变化,Western blotting检测ERK1/2、p-ERK1/2、MMP-9、MMP-2、GM-130的蛋白水平的变化。实验发现10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L浓度的U0126均能抑制MKN-45细胞的增殖,其中20μmol/L浓度作用48 h效果最强(p0.05),且该药物作用条件下MKN-45细胞凋亡增加,迁移和侵袭作用减弱(p0.05)。Western blotting结果显示,药物处理组ERK1/2蛋白水平不变,而p-ERK1/2、MMP-9、MMP-2、GM-130的蛋白水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(p0.05)。RT-q PCR结果显示,药物处理组GM130的m RNA水平明显低于阴性对照组和空白对照组(p0.05)。以上研究结果均表明U0126可促进MKN-45细胞凋亡,降低细胞体外增殖、迁移和侵袭的能力,其机制可能与p-ERK1/2和GM130的表达被抑制有关。     

卤地菊乙醇提取物W40单体诱导GLC-82细胞凋亡的分子机制研究

目的:探讨卤地菊Wedelia prostrate(Hook.et Arn.)Hemsl.的乙醇提取物W40单体对非小细胞肺癌GLC-82细胞的抗肿瘤作用分子机制。方法:通过MTT和克隆形成抑制实验检测W40对非小细胞肺癌GLC-82细胞增殖的影响;通过细胞划痕实验检测W40对细胞迁移的影响;通过Annexin V-FITC/PI双染法检测W40对细胞凋亡的诱导;通过Western blotting分析细胞增殖和凋亡相关蛋白的水平。结果:MTT实验表明,W40对GLC-82细胞有较为明显的细胞毒作用;克隆形成抑制实验表明,W40可以显著抑制GLC-82细胞增殖,且抑制程度呈现浓度依赖效应;细胞划痕实验表明,W40能够在一定程度上抑制GLC-82细胞的迁移能力;Annexin V-FITC/PI双染的结果显示,随着药物浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,p-Stat3蛋白的表达水平下降,Stat3下游蛋白Bcl-2、Mcl-1的表达减少。同时,促凋亡蛋白Bax的表达增多,并伴随Caspase-9、Caspase-3活化及多聚ADP-核糖聚合酶PARP酶切失活;p-BRAF蛋白的表达水平下降,p-BRAF下游蛋白p-MEK、p-ERK表达减少。结论:W40通过抑制BRAF/MAPK/ERK及Stat3信号通路来诱导细胞凋亡。     

NDRG1基因过表达对胆囊癌GBS-SD细胞增殖及凋亡的影响

为了探讨N-myc下游调节基因1 (NDRG1)过表达对胆囊癌细胞系GBS-SD细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其可能的分子机制,本研究采用脂质体介导的重组真核表达质粒pEGFP-NDRG1-N3瞬时转染人胆囊癌GBS-SD细胞,Western blotting检测NDRG1蛋白的表达;MTT比色法和流式细胞术分别检测细胞增殖和细胞周期;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。GBS-SD细胞转染pEGFP-NDRG1-N3重组质粒后经表阿霉素(0.4μg/mL)诱导其凋亡,采用Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blotingt检测Bcl-2、Cleaved caspase-3和Bid蛋白的表达。MTT检测显示,NDRG1过表达组细胞在48 h和72 h的增殖速度均显著高于空载组和对照组(p0.05)。Transwell检测显示,与对照组和空载组相比,NDRG1过表达组细胞的侵袭和迁移能力明显增强。Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测显示,经表阿霉素诱导细胞凋亡后,空载组细胞的凋亡率最高,NDRG1过表达组细胞的凋亡率低于空载组,但显著高于对照组。Western blotting检测显示,与对照组和空载组相比,NDRG1过表达组细胞中Bcl-2的表达明显上调,而Cleaved caspase-3和Bid的表达明显下调。本研究表明NDRG1基因过表达可显著促进胆囊癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制其凋亡,其分子机制可能是上调的NDRG1基因能有效调节与细胞凋亡相关基因的表达,从而发挥其介导作用。因此,NDRG1基因可能成为胆囊癌研究中一个新的治疗靶点。     

10-羟基喜树碱对人膀胱癌细胞增殖、侵袭的抑制作用及诱导凋亡的研究

探讨10-羟基喜树碱(10-HCPT)对人膀胱癌细胞T24增殖、侵袭和诱导凋亡的作用.0.25μmol/L和0.50μmol/L10-HCPT处理T24细胞4d后,用细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、侵袭试验、趋化运动试验、黏附试验和组织蛋白酶B活性测定细胞增殖和侵袭能力的变化;药物处理2d后,采用吖啶橙/溴乙啶荧光双染法和末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP-地高辛缺口末端标记法检测细胞凋亡.结果0.25μmol/L和0.50μmol/L10-HCPT分别使T24细胞增殖下降66.1%和74.8%;对细胞侵袭、运动、黏附及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用,并使T24细胞凋亡率显著升高,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05或0.01).提示10-HCPT有抗T24增殖和侵袭作用,并有诱导凋亡的作用.其抗侵袭机制是对侵袭的多个基本环节起抑制作用.     

姜黄素对A549肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及与Keap1/Nrf2信号通路的关系

目的探究姜黄素对肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及其机制。方法通过MTT法检测姜黄素对A549细胞增殖能力的影响;通过流式细胞术测定姜黄素对A549细胞凋亡的调节作用;通过Transwell试验,观察姜黄素对肺癌A549细胞的侵袭和迁移能力的影响;采用Western blot实验和RT-PCR实验,观察姜黄素对其Keap1/Nrf2信号通路的调节作用。结果增殖实验、凋亡实验和Transwell实验显示,姜黄素能够显著性抑制癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并能够促进其凋亡。Western blot检测显示姜黄素能够显著抑制Keap1和Nrf2表达;RT-PCR实验结果显示姜黄素能够显著抑制Keap1mRNA和Nrf2 mRNA表达。结论姜黄素可能通过抑制Keap1/Nrf2信号通路蛋白的表达而抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。     

姜黄挥发油对人皮肤鳞癌SCL-1细胞增殖、迁移和侵袭作用及其促凋亡机制研究

研究姜黄挥发油(TVO)对人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞体外增殖、迁移与侵袭的影响,初步探讨其凋亡作用机制。运用MTT法检测不同浓度TVO在不同时间段(24、48、72h)对SCL-1细胞体外增殖的影响;细胞划痕和细胞侵袭实验检测TVO对皮肤鳞癌SCL-1细胞体外迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术分析及显微镜观察确定TVO诱导SCL-1细胞的诱导凋亡率;Western blot检测TVO对皮肤鳞癌SCL-1细胞Survivin及Caspase-3蛋白表达的影响。TVO对SCL-1细胞的体外增殖、迁移和侵袭具有抑制作用(P0.05),且呈时间-剂量依赖性;流式细胞仪分析及显微镜观察表明TVO可诱导SCL-1细胞凋亡(P0.05),且与其浓度呈正相关;Western blot检测结果表明TVO能显著上调凋亡相关蛋白Caspase-3的表达(P0.05)、下调Survivin蛋白的表达(P0.05)。TVO能够显著抑制人皮肤鳞癌SCL-1细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力,且诱导细胞凋亡,其可能的机制是通过调节凋亡相关蛋白survivin、caspase-3蛋白的表达。     

白术抑制胃癌细胞SGC-7901增殖并促进其凋亡

目的观察白术对胃癌SGC-7901侧群细胞及非侧群细胞增殖及凋亡的影响。方法流式细胞仪分选SGC-7901中的侧群细胞;制备含白术药物血清;CCK-8法检测白术药物血清对细胞增殖能力的影响;流式细胞仪检测含白术药物血清对细胞凋亡的影响;Western blot检测药物血清对细胞中Bax及Bcl-2蛋白表达的影响;异种移植BALB/C小鼠成瘤实验观察白术对细胞体内成瘤能力影响;免疫组织化学检测白术对小鼠肿瘤组织中Bax及Bcl-2蛋白表达的影响。结果离体实验表明,含白术药物血清培养可明显降低SGC-7901侧群细胞的增殖率,同时可诱导其凋亡、分别上调和下调细胞中Bax和Bcl-2水平;在体实验显示,白术汤剂灌胃可显著抑制SGC-7901侧群细胞小鼠成瘤能力,分别上调和下调肿瘤组织中Bax和Bcl-2水平。非侧群细胞也有上述表现。结论白术可通过上调促凋亡蛋白Bax及下调抑凋亡蛋白Bcl-2从而促进胃癌SGC-7901侧群细胞及非侧群细胞凋亡,并抑制其增殖及体内成瘤能力。     

多胺类似物BENS和TBP对胰腺癌PANC-1细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响

为探讨多胺类似物BENS和TBP对胰腺癌PANC-1细胞生长的影响、促进细胞凋亡的机制以及迁移能力的影响,运用MTT法检测药物对细胞生长的影响;亚凋亡峰流式细胞分析法及TUNEL法检测细胞凋亡;Western blotting法测定Bax蛋白、细胞色素C蛋白的表达变化;Ranswell技术检测细胞迁移能力的改变。分析发现,两种多胺类似物均可显著抑制PANC1癌细胞增殖,抑制作用随药物浓度加大而增加,其细胞毒性大小依次为BENSTBP。细胞凋亡分析发现,BENS和TBP均可诱导PANC1发生细胞程序性凋亡,导致亚凋亡峰出现和明显的DNA断裂现象。胞浆中Bax蛋白和细胞色素C含量显著增加,同时显著性抑制PANC1细胞的迁移能力。表明BENS和TBP能够抑制人胰腺癌PANC1细胞增殖;阻止PANC1细胞迁移的能力;同时诱导细胞发生凋亡,其作用机制可能与改变肿瘤细胞正常的细胞周期,活化线粒体参与的细胞凋亡途径相关。     

HOXD9促进肺癌发生发展的生物学作用及初步机制

摘要 目的：探究同源盒基因HOXD9在H3255、H2170肺癌细胞株中的生物学作用及作用机制。方法：构建HOXD9过表达稳转H3255、H2170肺癌细胞株,通过CCK-8、克隆形成、小鼠皮下瘤实验检测HOXD9对肺癌细胞增殖的影响;利用transwell、基质胶实验检测HOXD9对肺癌细胞迁移及侵袭的影响;采用彗星实验、磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）免疫荧光染色检测HOXD9对肺癌细胞DNA损伤的影响;通过流式细胞术检测HOXD9对肺癌细胞凋亡的影响;通过qRT-PCR、western blot、luciferase、ChIP、rescue实验探究HOXD9在肺癌中促癌的作用机制。结果：CCK-8、克隆形成、小鼠皮下瘤实验显示HOXD9可促进肺癌细胞增殖;transwell实验表明HOXD9可促进肺癌细胞迁移;基质胶实验显示HOXD9可促进肺癌细胞侵袭;彗星实验与γH2AX免疫荧光染色提示HOXD9可抑制肺癌细胞DNA损伤;流式细胞术显示HOXD9可抑制肺癌细胞凋亡。HOXD9可通过转录上调肺癌细胞中增殖细胞核抗原PCNA的表达水平。结论：HOXD9可通过促进PCNA的转录介导肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制肺癌细胞DNA损伤及凋亡。     

2-羟基-3-甲基蒽醌抑制结直肠癌的作用及机制研究

为观察2-羟基-3-甲基蒽醌(HMA)对结直肠癌细胞增殖的影响并探讨其作用机制,本研究采用CCK8法检测HMA对结直肠癌细胞增殖的影响;Heochst-33343/PI染色检测细胞凋亡情况;同时检测细胞内ROS及GSH含量变化并应用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白及Keap-1/Nrf-2/ARE信号途径相关蛋白的表达。实验结果显示,HMA给予结直肠癌细胞后,细胞内ROS含量升高,GSH含量减少;HMA通过抑制Keap-1/Nrf-2/HO-1通路,诱导细胞发生凋亡。综上表明HMA具有抑制结肠癌细胞增殖的作用,其机制可能与破坏细胞内氧化还原平衡,抑制Keap-1/Nrf-2/HO-1通路有关。     

UHRF1基因在乳腺癌循环肿瘤细胞中的表达研究

外周血液中乳腺循环癌肿瘤细胞的生物表征与转移性乳腺癌的严重程度密切相关,本研究的目的在于结合体外细胞实验探讨UHRF1基因对乳腺癌进展的意义。多重RNA原位分析乳腺癌循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)中UHRF1的表达;MTT法检测UHRF1基因转染对正常乳腺细胞增殖的影响;蛋白免疫印迹检测UHRF1基因转染对正常乳腺细胞中Bax蛋白和Bcl-2蛋白的影响;Caspase-3检测试剂盒检测正常乳腺细胞中Caspase-3活性;Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测UHRF1基因转染对正常乳腺细胞侵袭和迁移能力的影响。研究发现,UHRF1 RNA水平在乳腺癌循环肿瘤细胞中高表达;UHRF1基因增加正常乳腺细胞增殖率;UHRF1基因降低正常乳腺细胞中Caspase-3活性;UHRF1基因降低正常乳腺细胞中Bax蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达;UHRF1基因增强正常乳腺细胞侵袭和迁移能力。本研究初步说明,UHRF1可促进正常乳腺细胞增殖,抑制正常乳腺细胞凋亡,增强正常乳腺细胞侵袭和迁移能力。     

miR-345靶向调控 TGM1抑制膀胱癌的初步研究

目的:探讨mi R-345调控TGM1表达影响膀胱癌的分子生物学机制。方法:首先,采用RT-qPCR检测T24和RT4细胞中mi R-345、TGM1的表达;再采用mi RNA-NC、mi R-345 mimic、NC inhibitor、mi R-345 inhibitor、control si RNA、si TGM1和pc-DNA3.1/TGM1等转染膀胱癌细胞;然后,采用MTT实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡,双荧光报告酶检测mi R-345的靶基因;最后,采用Western blot检测TGM1在细胞中的表达。结果:mi R-345在T24和RT4细胞中表达低于正常细胞(P0.05)。mi R-345过表达时,T24和RT4细胞的增殖侵袭能力减弱,细胞凋亡率上升;mi R-345表达沉默时,细胞增殖和侵袭能力增强,细胞凋亡率下降。双荧光报告基因检测结果显示TGM1为mi R-345的靶基因,mi R-345过表达抑制TGM1的表达(P0.05);mi R-345表达沉默时则表达上调(P0.05)。当TGM1表达沉默时,T24和RT4细胞的增殖和侵袭能力减弱,细胞凋亡率上升;TGM1过表达时该细胞的增殖和侵袭能力增强,细胞凋亡率下降。结论:mi R-345通过下调靶基因TGM1的表达,抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭并促进细胞凋亡。     

白皮杉醇对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭的影响

本研究旨在考察白皮杉醇(piceatannol, PIC)对子宫内膜癌细胞HEC-1A的初步抗肿瘤作用。分别通过CCK-8实验、平板克隆形成实验、流式细胞术、划痕损伤修复实验和Transwell小室实验检测不同浓度的PIC对HEC-1A细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白和侵袭迁移相关蛋白的表达水平。结果显示，与空白组相比，PIC能显著抑制HEC-1A细胞增殖、克隆形成能力、诱导其凋亡并减少细胞迁移距离和侵袭细胞数(P<0.01),下调p-Akt、p-Erk1/2、p-p38MAPK、β-catenin、CD44和Slug蛋白的表达水平，上调E-cadherin蛋白的表达水平(P<0.01)。综上所述，PIC呈浓度依赖性抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖、迁移与侵袭，其机制可能与抑制AKT/ERK/MAPK信号通路和影响Wnt/β-catenin信号通路和上皮-间质转化标志物的改变有关。     

EGR1促进前列腺增生上皮细胞系 BPH-1的增殖

早期生长反应基因1（early growth response gene 1, EGR1）属于锌指结构的转录因子,表达受多种因素调节,其蛋白至少参与对30种以上靶基因的调控. EGR1在前列腺癌中作为癌基因其表达量与肿瘤的恶性程度成正比,而在良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia, BPH）中其机制和功能尚不明确. EGR1在大鼠和人BPH组织中表达升高, 提示EGR1在BPH进程中发挥重要作用. 通过构建EGR1表达载体,以及EGR1稳定转染的良性前列腺增生上皮细胞系BPH-1,可见过表达EGR1的BPH-1细胞增殖能力升高. 通过转染siRNA将EGR1表达抑制,BPH 1细胞的增殖水平下降. 雌激素在BPH疾病进程中发挥重要作用, 在BPH 1细胞中,雌二醇 (estradiol, E2) 能促进EGR1的核迁移,从而激活其转录活性. 在EGR1稳定转染的BPH 1细胞系中胰岛素样生长因子2 (insulin like growth factor 2, IGF2) 的表达上调,表明EGR1可以调控IGF2的表达. 同时发现,E2可上调BPH-1细胞中 IGF2的表达,而将EGR1敲除后上调效果消失, 说明E2通过EGR1来调节IGF2的表达. E2对EGR1及其靶基因的调节可能是E2参与影响BPH的重要环节. 本文为进一步研究E2和EGR1在BPH中作用奠定了基础.     

DLX1过表达对骨肉瘤细胞MG63迁移、侵袭、凋亡和增殖的影响

前期经基因芯片筛选发现,同源盒基因1(distal-less homeobox 1,DLX1)低表达是导致骨肉瘤形成的关键基因。该研究在此基础上,拟通过过表达DLX1探讨其对骨肉瘤细胞MG63迁移和侵袭等生物学特征的影响,并初步揭示其作用途径。采用含DLX1基因的重组腺病毒Ad DLX1(adenovirus distal-less homeobox 1)和空载腺病毒Ad RFP(adenovirus red fl uorescence protein)分别感染人骨肉瘤细胞MG63,观察细胞荧光表达情况,并用RT-PCR和Western blot验证DLX1表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;DAPI染色和流式细胞术检测细胞凋亡水平;CCK-8检测细胞增殖能力;RT-PCR和Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达。结果显示,与对照组(Ad RFP感染组)相比,Ad DLX1能显著增加MG63细胞中DLX1的表达,并导致细胞迁移和侵袭能力下降,但细胞增殖和凋亡情况无明显改变。DLX1过表达还可以上调Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的表达。该研究表明,DLX1可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞MG63的迁移和侵袭。     

芳姜黄酮对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞迁移、侵袭及凋亡的影响和机制研究

为研究芳姜黄酮(Ar-Turmerone)对人鳞状细胞癌A431细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及机制。实验采用CCK-8法检测抑制率,吉姆萨染色观察细胞形态,划痕实验和Transwell小室实验研究细胞迁移和侵袭能力的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。此外,通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)与蛋白质印迹法(western blot)法检测mRNA和蛋白表达。siRNA阻断Notch1,Hes1和PTEN,检测相应的下游mRNA和蛋白的表达变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果发现,芳姜黄酮可以抑制A431细胞增殖,使细胞形态发生改变,抑制细胞体外迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡。经过芳姜黄酮处理后,Notch1,Hes1,PTEN的mRNA和蛋白表达升高。沉默Notch1,Hes1 mRNA和蛋白表达低于单纯给药组,而沉默Hes1,PTEN mRNA和蛋白表达也低于单纯给药组;沉默PTEN后,与单纯给药组相比,细胞死亡率降低。总之,芳姜黄酮可以抑制人鳞状细胞癌A431细胞的增殖并促进其凋亡,且具有抑制体外迁移和侵袭的作用,其促进细胞凋亡的机制是通过Notch1/Hes1/PTEN途径实现的。