金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的生产和精制的改良方法

<正>有些研究表明:产生金黄色葡萄球菌肠毒素B(Staphylococcus auresus Enterooxin B:SEB)的最佳条件是用酪蛋白水解物这类综合培养基。这些培养基多数系非商品,尤其是最近使用的N-Z胺-NAK酪蛋白水解物。为此我们拟寻求一种新的且容易获得的培养基以生产SEB。 精制SEB已有多种工艺。大多数方法表     

丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片质控参比品的建立及质量验证

建立能同时检测丙型肝炎病毒(HCV)嵌合抗体、核心抗体和NS3、NS4、NS5抗体的蛋白质芯片质控参比品,对质控合格的芯片进行质量验证。用3种HCV EIA试剂分别检测从3家医院收集的丙型肝炎病毒感染患血清及其他非HCV感染患血清,从3种EIA试剂同时阴性或阳性的血样中挑取阳性和阴性血清,然后用RNA hyb PCR试剂进行检测,从中再选取部分样本用RIBA3．0进行检测,确定HCV分片段抗体检测蛋白质芯片质控参比品。经质检合格的芯片用中国药品生物制品检定所的HCV参比品进行检定。通过490例临床标本的检测对芯片的质量进行进一步的验证。从收集的240份丙型肝炎病毒感染患血清及其他非HCV感染患血清筛选出30份血样(15份阳性,15份阴性)作为HCV分片段抗体检测蛋白芯片质控参比品。中国药品生物制品检定所的80份HCV参比品检定结果表明,混合抗体阳性检出率为39／40,阴性符合率为40／40,总符合率为98．7％;核心抗体阳性检出率为27／40,阴性符合率为40／40;NS3抗体阳性检出率为26／40,阴性符合率为39／40;NS4抗体阳性检出率为19／40,阴性符合率为40／40;NS5抗体阳性检出率2／40,阴性符合率为40／40。490例临床标本的检测结果表明,对于194例HCV阳性标本,蛋白质芯片混合抗体与ELISA的符合率达99．5％,分片段抗体符合率达97．4％,两种方法检测结果不符的标本经RIBA试剂确认,蛋白质芯片与RIBA试剂的符合率高度一致。对于296例各种HCV抗体阴性标本,蛋白质芯片检测结果全部为阴性。以上结果表明,制备的丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片质控参比品可用于芯片生产的质量控制,经质控合格的芯片符合国家标准的要求,可用于临床检测。     

同时检测血清中多种抗体的蛋白质微阵列研究

建立一种用蛋白质微阵列法可同时检测血清中艾滋病毒（HIV）, 丙型肝炎病毒（HCV）和梅毒螺旋体（TP）抗体的方法.将基因工程HIV、HCV和TP 3种融合抗原共价结合于固相载体玻片上,制成蛋白质微阵列,血清样本经稀释、加样、孵育、洗涤后,加上Cy3荧光标记二抗,洗涤,激光共聚扫描,将获得的图片用Bio-discover公司的Imagene专用分析软件进行分析,所获数据在经过自行编写的软件,根据Cutoff值自动生成判断结果.用此蛋白质微阵列系统检测了400例阴性血清,确定了Cutoff值,检测中国药品生物制品检定研究所的HIV, HCV和TP 3种参比品,并与3种ELISA试剂盒的结果进行了比较.蛋白质微阵列的艾滋病毒阳性和阴性符合率均为100%(20/20); 丙型肝炎病毒阳性和阴性符合率均为95%(38/40).梅毒螺旋体参比品阳性符合率为100%(10/10),阴性符合率为100%(20/20),蛋白质微阵列与三种ELISA试剂检测国家HIV、TP、HCV参比品（共150份血清样本）,结果具有高度的符合率.     

丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片的制备及临床评价

为了制备丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片,并对其临床应用价值进行评价,将基因工程表达的丙型肝炎病毒分片段抗原,点至经特殊处理的玻片上,制成蛋白质芯片.收集来自三家临床单位用于临床验证的905份血清标本.分别用丙肝病毒分片段抗体检测蛋白质芯片、ELISA丙肝病毒抗体检测试剂进行检测.部分样本同时采用进口RIBA抗体检测试剂进行了检测,分别比较蛋白质芯片法与ELISA法以及RIBA试剂的符合率.结果表明：a.905份血清标本,ELISA法检出阳性294份,阴性611份.阳性标本用蛋白质芯片法检测,融合抗原292份显示阳性结果、2份阴性结果,根据蛋白质芯片的核心抗原,以及NS3, NS4,NS5分片段抗原综合判断确定阳性样本288份阳性,阴性样本2份,4份样本结果不确定.ELISA法检出的611份阴性标本用两种蛋白质芯片法检测,检出阴性均为611份.两种蛋白质芯片法与ELISA法的阳性符合率分别为99.3%和98.9%,与ELISA法的阴性符合率均为100%.用RIBA 试剂检测6份ELISA法为阳性,蛋白质芯片法为非阳性的样本,结果均为非阳性.b.290份经 RIBA试剂确认的阳性标本104份,单片段阳性标本66份,阴性标本120份,用蛋白质芯片法检测,检出阳性标本103份,单片段阳性标本61份,阴性标本126份,二者具有很高的符合率（P＞0.01）.丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片,检测灵敏度和特异性高于ELISA法,对血清样本的确认程度与进口的RIBA试剂高度一致,具有操作简便,费用低廉的特点,是一种新型、高效的体外诊断试剂.