Sinorhizobium fredii WGF03胞外多糖分泌相关基因exoD功能初探

从费氏中华根瘤菌WGF03的基因组中克隆出与胞外多糖分泌密切相关的基因exoD,研究该基因对胞外多糖合成、菌株共生结瘤能力和固氮效率的影响。利用自杀性质粒pK18mobsacB,通过同源双交换法构建exoD基因的缺失突变体ΔexoD。实验发现:与野生菌株相比,突变株在YMA培养基平板上胞外多糖产量明显减少、运动能力也有所减弱;在NaCl浓度小于350 mmol/L范围内,菌体均能维持稳定生长;接种于大豆幼苗后,产生的根瘤数量较多,但个体小、形状不一,且固氮酶活也显著下降。研究结果说明exoD基因参与S.fredii WGF03胞外多糖的合成并影响菌株共生结瘤能力和固氮效率。     

S. fre dii WGF03 SiR基因的功能鉴定

亚硫酸盐还原酶催化亚硫酸盐还原为硫化物,参与了生物硫循环。为了明确亚硫酸盐还原酶在S. fredii WGF03中是否与亚硫酸盐同化途径有关,通过分子克隆技术,采用同源双交换的方法,利用质粒pK18mobs ac B构建SiR基因缺失突变体SiRI。用不同硫源的液体MM培养基培养检测,发现互补菌株CSiRI与野生型菌株能够利用亚硫酸盐作为唯一硫源,而突变体SiRI却不能,结果证实了亚硫酸还原酶确实与亚硫酸盐同化途径有关。植株试验表明突变株SiRI比野生菌株WGF03推迟结瘤2~3 d,固氮酶活比野生菌株低12%左右,但在瘤数,瘤重,植株干重的平均值却差异不大。