大鼠肝纤维化相关microRNA及其候选靶基因的筛选

microRNAs (miRNAs)是一类功能性非编码RNA,在多种生物过程中具有重要作用.然而,miRNA的表达模式、调控网络以及参与肝纤维化的miRNA仍有待阐明.为了探讨与肝纤维化相关的miRNA及其靶基因的功能,为临床肝纤维化治疗提供理论依据,本研究前期已采用胆管结扎法(BDL)建立大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型.从大鼠肝脏中提取总RNA,应用基因芯片技术对胆汁淤积性肝纤维化肝组织中miRNA和mRNA表达谱进行综合分析;结合生物信息方法分析在胆汁淤积性肝纤维化中差异表达miRNA可能的靶基因;实时荧光定量PCR技术检测TGF-β1处理人肝星状细胞LX-2细胞中miR-29a-3p、miR-194-5p和miR-22-3p相对表达水平.结果 表明,与正常肝组织相比,纤维化肝组织中有48个差异表达miRNA (FC＞2,P＜0.05),其中36个上调,12个下调;筛选出18个预测靶基因参与与纤维化相关的生物过程;TGF-β1处理LX-2细胞中miR-29a-3p、miR-194-5p和miR-22-3p相对表达水平显著下调(P＜0.05).本研究筛选的差异表达miRNAs通过调节靶基因的表达在肝纤维化中可能发挥重要作用,将为miRNA在肝纤维化中的作用提供新的见解.     

MiR-199a-5p对肝星状细胞活化增殖的影响

miR-199a-5p是miRNAs家族的一员.为探讨对人肝星状细胞活化增殖和迁移的影响,为临床肝纤维化治疗提供新的思路,本研究构建miR-199a-5p过表达载体、合成miR-199a-5p反义寡聚核苷酸(anti-sense oligonucleotide,ASO)经脂质体转染LX-2细胞.采用CCK-8法和Transwell分别检测细胞增殖和迁移能力;集落形成实验检测LX-2细胞的集落形成能力;实时荧光定量PCR技术检测细胞中转染miR-199a-5p后纤维化相关基因α-SMA和Collagen Ⅰ的mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞中α-SMA表达水平.结果 表明miR-199a-5p可以促进LX-2细胞增殖(P＜0.01)、迁移(P＜0.01)和集落形成(P＜0.01);而ASO-199a-5p-5p组细胞增殖(P＜0.01)、迁移能力(P＜0.01)和集落形成能力(P＜0.01)受到抑制.RT-qPCR结果显示miR-199a-5p在受TGF-β1刺激后的LX-2细胞中的miRNA表达水平高于未受刺激组的(P＜0.05),转染miR-199a组细胞中α-SMA的mRNA(P＜0.01)和蛋白(P＜0.05)表达水平升高.以上结论表明miR-199a-5p过表达能促进肝星状细胞活化、增殖.     

微小RNA在恶性肿瘤靶向治疗中的研究进展

恶性肿瘤一直是当今世界最难攻克的顽疾之一,肿瘤靶向治疗以其高效低毒等特点为病人带来了新的希望,目前的靶向药物主要是单克隆抗体和小分子酪氨酸激酶抑制剂。微小RNA(micro RNA,mi RNA)是一类小的、进化保守的非编码RNA,负性调节编码基因以及非编码转录因子的表达,是各种细胞主要调控者,在肿瘤的发生、进展以及转移中发挥了重要的作用。研究显示,多种肿瘤均存在大量发挥癌基因或抑癌基因作用的mi RNA的表达失调,而这些表达异常的mi RNA已成为人们研制肿瘤靶向治疗的又一新工具。因此本研究就近年来mi RNA在肿瘤靶向治疗中的相关研究做一简要综述,以期为肿瘤的靶向治疗提供新的视角。     

miR-615-3p是胃癌诊断和预后的潜在标志物

miR-615-3p是miRNA家族的一员。为了探讨miR-615-3p在胃癌诊断和预后中的作用,我们应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测了35例胃癌组织(13例低分化,22例中高分化)及良性胃病组织,以及此35例患者的治疗前血清及35例健康体检者血清中miR-615-3p的相对表达情况,分析了其和胃癌的临床病理因素之间的关系,计算其用于区分胃癌和健康人群的灵敏度、特异度。检测数据显示,低分化胃癌组中miR-615-3p的水平显著高于良性病变组及中高分化胃癌组(p0.01),而在中高分化胃癌组的表达水平与良性病变组比较差异无统计学意义(p0.05)。低分化和中高分化胃癌患者血清中miR-615-3p的水平均显著高于健康组(p0.01),低分化胃癌患者血清中miR-615-3p的水平显著高于中高分化胃癌血清组(p0.01)。miR-615-3p的表达水平与胃癌患者的性别、年龄无关(p0.05),与病理类型、TNM分期相关(p0.05)。miR-615-3p受试者的工作特征曲线下面积为0.803(95%CI(0.707,0.906)),与A=0.5比较,差异有统计学意义。以上结论表明,miR-615-3p的表达水平与胃癌组织的分化和分期呈正相关,检测组织和血清中miR-615-3p的水平对胃癌有较高的诊断价值。miR-615-3p可作为胃癌诊断、预后的潜在标志物。