一个未知的子宫雌激素反应蛋白ULF-250的鉴定研究

摘要 鉴定一个未知的子宫雌激素反应蛋白（ULF-250）。去卵巢大鼠补充给予雌二醇造成子宫产生大量宫腔液（ULF）,受雌激素调节的蛋白分泌其中。收集ULF分别进行SDS-PAGE和双向电泳（2-DE）分离;通过Western 和2D-Western确认抗ULF-250抗体识别的蛋白成分并与凝胶上的条带或斑点相对应;对目标蛋白分别用MALDI-TOF-MS和HPLC-ESI-MS/MS两种方法进行质谱分析并获得肽段序列数据;与蛋白数据库比对及文献检索鉴定未知蛋白。2D-Western显示抗ULF-250抗体特异识别的蛋白成分。从2D胶上切下对应的蛋白斑点进行MALDI-TOF-MS。 结果提示：ULF-250是ebnerin/DMBT1。另外,经SDS-PAGE分离的250 kD蛋白条带进行液-质联用分析。结果同样提示：ULF-250是ebnerin/DMBT1。与文献报道比较,ULF-250与ebnerin/DMBT1在子宫的组织定位和调节是相同的。因此,我们认为ULF-250是子宫表达的ebnerin/DMBT1。通过2-DE结合质谱分析以及查阅文献确认未知的雌激素反应蛋白ULF-250是ebnerin/DMBT1。此外,我们的研究提示,该蛋白不仅在子宫上皮细胞表达而且分泌到子宫腔液中,其功能值得进一步研究。     

“小组学习”模式在基础医学课程中的实践应用：以医学免疫学为例

将"小组学习"模式应用于基础医学课程"医学免疫学"的教学,在理论课堂采用案例导学、问题导学、角色转换导学和专题讨论导学,实践教学过程针对课堂实验、实验选修课和大学生创新创业项目进行层次化导学。综合运用思维导图、问卷星、成长袋等多元化教学方法和手段,编写思政案例库进行专业课课程思政,结合小组过程性考核进行多元化考核评价。该模式通过培养学生自主学习能力、小组合作能力、实践能力、创新能力和人文素质,为培养高素质、高能力的应用型医学人才奠定基础。该教学模式得到了绝大多数学生的认同,可为基础医学及其他相关课程的开展及高校人才培养提供思路和参考。     

硫代硫酸钠干扰斑马鱼胚胎发育并致畸

硫的衍生物潜在的威胁着胚胎的发育过程.斑马鱼被用于研究不同浓度（1×10-6～1 mol/L）的硫代硫酸钠（sodium thiosulfate, STS）对胚胎发育的影响,在解剖显微镜下实时观察斑马鱼胚胎发育的全过程.采用Western 印迹法检测乙酰化的微管蛋白——α-微管蛋白（acetylated tubulin, α-tubulin）和神经元增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达,分别检测STS暴露后胚胎的运动神经元功能,神经元的增殖状态.发育中的斑马鱼胚胎暴露于0.1～1 mol/L STS,呈现出严重的发育迟缓,并且伴随多脏器畸形;暴露于10 μmol/L～10 mmol/L STS,胚胎呈现循环系统,神经系统以及颌面部畸形.胚胎在48 hpf (hours post fertilization)时,对STS的暴露敏感高于24 hpf和96 hpf.STS可能干扰细胞的增殖及运动神经元的正常分化.STS可能干扰正常的细胞骨架结构,并在胚胎发育晚期影响细胞增殖,对胚胎神经系统、循环系统及颌面部有致畸作用.     

草莓中诺如病毒不同洗脱和富集方法的评估

评估一种快速和敏感富集草莓中诺如病毒的方法,为病毒性食源性疾病的防控提供支持。以鼠诺如病毒-1(MNV-1)为模式病毒,考察Tralk洗脱液、TGBE洗脱液和NaOH洗脱液对MNV-1的洗脱效果,检测5%、10%和15%PEG6000/0.3M NaCl对MNV-1的富集效果,评估优化后方法对草莓中诺如病毒的富集效果和超滤二次浓缩对诺如病毒富集效果影响。结果表明TGBE缓冲液洗脱效果优于Tralk洗脱液和NaOH洗脱液;10%PEG6000/0.3M NaCl与15%PEG6000/0.3M NaCl对MNV-1的富集效果相同,且二者的富集效果均高于5%PEG6000/0.3M NaCl;该优化方法可在7h内完成草莓中诺如病毒的富集,诺如病毒的回收率最高可达44.04%,超滤二次浓缩后,诺如病毒的检测限达到102基因拷贝数/10g草莓。     

脑膜炎奈瑟菌疫苗研制进展

由脑膜炎奈瑟菌引起的流行性脑脊髓膜炎是一种对人类危害严重的传染性疾病,曾在全球引起多次大流行,所以关于其预防引起了全世界的高度重视。目前应用和研究的脑膜炎奈瑟菌疫苗主要有荚膜多糖疫苗、多糖与蛋白结合疫苗、B群改良疫苗、去毒脂多糖结合疫苗等,本文就以上疫苗的研制情况进行综述。     

过氧化物酶6在大鼠附睾中的表达及分布

通过双向电泳结合质谱技术分离鉴定正常成年大鼠附睾头段与尾段管腔液中的蛋白组成,从附睾头段及尾段管腔液的22个差异蛋白点中鉴定出12个蛋白质.其中11个蛋白质在不同种属哺乳动物的附睾组织中已有鉴定报道,而过氧化物酶6(peroxiredoxin 6,Prdx6)为新发现的存在于附睾头段及尾段管腔液中的体液蛋白.采用RT-PCR、Western印迹及免疫组化技术,对该蛋白在大鼠附睾中的表达及分布进行了分析.实验表明,Prdx6与精子的成熟、贮存及保护有一定关系,其具体机制值得进一步深入研究.     

质谱法分析大鼠精子发生过程中组蛋白H1变异体的多样性

目的为探究连接组蛋白H1在精子发生过程染色体重构中的功能,了解一共有多少种连接组蛋白H1参与各期生精细胞的染色体的构建。方法分离高纯度的SD大鼠的各期生精细胞,提取组蛋白,应用SDS-PAGE分离组蛋白的各组分,组蛋白（H1）经过蛋白酶（Glu-c和Arg-c）酶切,应用质谱进行检测。结果鉴定了组蛋白H1的体细胞亚型（H1.1-H1.5）和睾丸特异的连接组蛋白亚型（H1t）。组蛋白H1t分别表达在精原细胞,精母细胞和圆形精子细胞中。结论大鼠精子发生过程中,其主要连接组蛋白H1的种类是：H1.1-H1.5和H1t。     

激发学生学习医学微生物学兴趣的“六个结合”教学法

医学微生物学一门与临床、社会、历史和生命科学发展前沿紧密联系的学科。“六个结合”教学法,就是基于这种联系、结合这些因素去讲授医学微生物学的教学法,是一种“源自生活”的教学法;“六个结合”教学法,可激发学生的学习兴趣,加深他们对教材知识的理解和记忆,并能将所学知识活学活用。     

大鼠侧脑室注射瘦素对卵巢摘除给予雌激素子宫腔液2-DE图谱分析

瘦素(leptin)通过动物下丘脑-垂体轴对其生殖活动予以调节,但瘦素通过下丘脑对子宫调节作用仍不清楚.本研究在大鼠侧脑室微量注射瘦素6 h后,采用双向凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分离、鉴定了卵巢摘除给予雌激素的子宫腔液蛋白质表达谱.我们获得了分辨率较高、重复性较好的2-DE图谱|质谱分析结合SwissProt蛋白数据库检索,共鉴定了24个差异表达的蛋白质与生理盐水注射（对照）比较,侧脑室微量注射瘦素引起22个蛋白质分子显著上调,2个显著下调.重要的是,在上调的蛋白质分子中包括转铁蛋白、基质金属蛋白酶7、膜联蛋白A1、补体B因子、磷酸甘油酸酯变位酶1、烯醇酶、冠蛋白-1A等15个蛋白质分子,下调的2个蛋白质分子是补体C3、溶解物载体家族4成员3.这些蛋白质分子涉及细胞分化、细胞迁移、细胞凋亡,以及炎症反应等功能.实验结果提示,瘦素可能通过下丘脑-垂体轴参与免疫调节、雌性生殖及炎症反应等,从而对子宫发挥调节作用.本研究将为加深对瘦素调节子宫作用的认识,并为深入研究女性生殖系统疾病提供新的启示.