半夏胰蛋白酶抑制剂的纯化与部分性质研究

应用以胰蛋白酶为配体的亲和层析法,从生半夏蛋白粗提液的40％（NH。）：SO4（M／V）沉淀中分离纯化出一种胰蛋白酶抑制剂（Rhizoma pinelliae trypsin inhibitor,RVn）,经SDS．PAGE检测呈现单一条带,分子量为14kD左右,其N-端6个氨基酸残基顺序为DPVVDG。研究表明,其对胰蛋白酶的质量抑制比为l：4．72左右,对人低分化胃腺癌细胞系（BGC-823）的细胞增殖具有抑制作用,IC50值为121．53μg／mL。     

银花青蒿栀子方抗A6型柯萨奇病毒的作用

A6型柯萨奇病毒(Coxsackievirus A6,CV-A6)感染致手足口病发病率呈上升趋势,逐渐成为部分地区的主要流行株.但是,CV-A6的相关研究目前较少,亟需抗CV-A6药物的研究.中药在抗病毒方面具有独特优势,银花青蒿栀子方(Yinhua-Qinghao-Zhizi,YQZ)对多种病毒有效,但对CV-A6的作用尚未见研究报道,本研究应用细胞和动物感染模型评价了 YQZ体内外抗CV-A6的作用.体外实验中,利用CV-A6感染RD细胞模型,以病毒抑制率和细胞上清病毒载量为指标评价YQZ的抗病毒作用,并采用Box-Behnken设计-响应面法优化YQZ的配伍比例.体内实验中,10日龄ICR乳鼠按窝随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(利巴韦林10 mg/kg)、低剂量YQZ组(生药1.3g/kg)和高剂量YQZ组(生药2.6g/kg).采用滴度为107.4TCID50/mL的CV-A6ip感染制备模型,统计生存率和临床评分;取骨骼肌、心脏、肺脏、脊髓、延髓等组织,HE染色观察病理变化;一步法RT-qPCR检测上述各组织的病毒载量.结果显示,YQZ抗CV-A6的最佳配伍为:金银花3 g、青蒿15 g、栀子2 g,其病毒抑制率和病毒载量拷贝数的对数均与模型预测值接近(P＞0.05),且活性显著优于对照利巴韦林(P＜0.01).与模型组相比,低、高剂量YQZ组乳鼠生存率提高,急性弛缓性麻痹等症状明显缓解,骨骼肌、心脏、肺脏等脏器的病理损伤明显减轻,上述组织病毒载量均下降,其中高剂量YQZ组乳鼠骨骼肌、心脏和肺组织中的病毒载量显著降低(P＜0.05).以上结果表明,Box-Behnken设计-响应面法可促进YQZ的配伍优化筛选、提高药效,优化配伍比例的YQZ具有良好的体内外抗CV-A6作用.     

基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS、网络药理学和实验验证探讨裸花紫珠抗H1N1活性成分及其作用机制

本实验首先对裸花紫珠的提取物进行萃取,得到不同的萃取部位,然后对各部位进行抗甲型流感病毒H1N1型(H1N1)活性筛选,确定裸花紫珠乙酸乙酯萃取部位(EACN)具有较好的体外抗H1N1的活性。采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱联用(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对EACN进行定性分析。基于定性分析的结果,进一步使用数据挖掘和网络药理学,评估药物的活性成分、关键靶点和关键通路,最后使用H1N1感染BALB/c小鼠模型对预测结果进行验证。结果显示,在各个萃取部位中,乙酸乙酯部位体外抗H1N1效果最佳,半数抑制浓度(IC₅₀)为51μg/mL,半数细胞毒浓度(CC₅₀)为859.4μg/mL,选择指数(SI,CC₅₀/IC₅₀)为16.85。从EACN中鉴定出34种化合物,在此基础上,利用网络药理学,筛选出和EACN抗H1N1相关的药物靶点67个,靶点共涉及生物过程491个,与抗H1N1相关的通路147个。H1N1感染BALB/c小鼠实验结果发现,EACN能改善H1N1...