基于CRISPR-Cas9系统的HSV-1基因治疗载体的快速构建北大核心CSCD

基因改造的1型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体在肿瘤溶瘤病毒治疗及基因转导中具有广泛的应用前景。本研究报道一种基于CRISPR-Cas9系统的高效快速的重组HSV-1载体构建方法。首先,双顺反表达靶点g DNA和Cas9核酸酶的基因编辑质粒与同源重组模板质粒共转染Vero细胞后,用亲本株感染细胞;然后,Cas9对胞内病毒基因组定点切割,诱导外源基因同源重组,修复至病毒基因组指定位点。通过PCR、Western印迹、免疫荧光等方法证明,相比于传统自发同源重组的构建方法,该方法能显著提升病毒重组率(4.1%vs 1.1%)。同时,本研究建立了一种新的单克隆病毒纯化方案,简化了阳性病毒筛选步骤。本研究结果提供了一种高效快速的重组HSV-1构建方法,这对于HSV-1相关基因治疗及其病理机制研究将具有重要意义。     

ABCA2基因mRNA在结核分枝杆菌不同感染阶段的表达及其作为诊断标志物的研究

摘要 目的：比较ATP结合转运蛋白A2（ATP-binding cassette transporterA2,ABCA2）基因mRNA在活动性结核病和结核分枝杆菌潜伏感染状态下的表达差异及其作为诊断标志物的能力。方法：收集活动性结核病患者、结核分枝杆菌潜伏感染者和健康人外周血,荧光定量PCR检测受试者外周血单个核细胞中ABCA2的mRNA水平,统计学分析各组ABCA2基因表达差异,及其鉴别活动性结核和潜伏感染的能力。结果：活动性结核病患者外周血单个核细胞中ABCA2的mRNA表达显著低于潜伏感染者和健康人（（H=83.38,P＜0.0001）。ABCA2鉴别诊断活动性结核和潜伏感染的曲线下面积为0.9235,灵敏度为73.53%（95%的置信区间为63.87%~81.78%）,特异性为93.55%（95%的置信区间为78.58%~99.21%）。结论：外周血单个核细胞中ABCA2基因mRNA是鉴别活动性结核病和潜伏感染者的潜在标志物,有助于活动性结核病的辅助诊断。     

表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌的构建

目的 建立可表达绿色荧光蛋白的耻垢分枝杆菌,便于对耻垢分枝杆菌进行直观检测和快速定量。方法利用PCR技术从真核表达质粒pLVTH扩增获得绿色荧光蛋白的编码基因,克隆人大肠埃希菌一分枝杆菌穿梭载体pMV261,建立重组质粒pMVGFP,并经酶切鉴定证实。利用电穿孔技术将pMVGFP转化入耻垢分枝杆菌,利用卡那霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆,扩大培养后直接涂片,荧光显微镜镜检。结果重组质粒pMVGFP构建正确;将重组耻垢分枝杆菌在荧光显微镜下观察,证实绿色荧光蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达。结论自发释放荧光的重组耻垢分枝杆菌的成功建立,为研究结核病致病机制和快速筛选化学药物等奠定了基础。     

自适应性生物反馈训练对出口梗阻型便秘患者肛肠动力学、胃肠激素水平及负性情绪的影响

摘要 目的：探讨自适应性生物反馈训练（ABF）对出口梗阻型便秘（OOC）患者肛肠动力学、胃肠激素水平及负性情绪的影响。方法：选取2021年6月～2022年12月江苏省中医院收治的104例OOC患者作为研究对象,按照随机数字表法分为观察组、对照组各52例。对照组采用固定式生物反馈训练（FBF）治疗,观察组采用ABF治疗。比较两组临床疗效、治疗前后便秘症状评分、肛肠动力学指标（直肠肛门压力梯度、直肠初始感觉阈值及直肠排便感觉阈值）、胃肠激素[P物质（SP）、胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）]水平及负性情绪[汉密尔顿焦虑量表（HAMA）与汉密尔顿抑郁量表（HAMD）]。结果：治疗后两组各项便秘症状评分和总评分均低于治疗前,且观察组低于对照组（P＜0.05）。观察组总有效率96.15%高于对照组82.69%（P＜0.05）。治疗后两组直肠肛门压力梯度高于治疗前,且观察组高于对照组;两组直肠初始感觉阈值及直肠排便感觉阈值低于治疗前,且观察组低于对照组（P＜0.05）。治疗后两组血清SP、MTL、GAS水平高于治疗前,且观察组高于对照组（P＜0.05）。治疗后两组HAMA、HAMD评分低于治疗前,且观察组低于对照组（P＜0.05）。结论：ABF可有效改善OOC患者临床症状、肛肠动力学、胃肠激素水平及负性情绪,提高临床疗效,值得临床推广应用。