不同批号蕲蛇酶在家兔血液凝固系统上的生物活性检测

目的：研究不同批号蕲蛇酶静脉给予家兔后,对血液凝固系统各项指标的影响,以判定其药效的稳定性。方法：取家兔,纯白色,体重1．5－2．5kg,雌雄兼用,每日静脉注入蕲蛇酶1．0u/kg.d^-1,连用3－5天,药前、药后从心脏取血6ml,取全血1ml作血栓形成;余血以3．0％枸橼酸钠按1：9抗凝,分离富血小板血浆（PRP）,测定其血小板数目和血小板聚集率,以贫血小板血浆（PPP）测定凝血酶时间（TT）,凝血酶原时间（PT）,部分凝血活酶时间（KPTT）以及纤维蛋白原（Fg)含量。结果：5个批号的蕲蛇酶药后3天或5天均可明显使血栓形成的重量减轻,长度缩短,Fg含量减少（P＜0．01）,TT,PT,KPTT均延长（P＜0．05－0．01）,血小板数轻度减少,聚集率抑制达20％－50％,结论：不同批号的蕲蛇酶静脉给予家兔,具有显著的作用于血液凝固系统,导致血栓形成减少,表明对心脑血管内血栓形成药学相同,说明用家 兔作为鉴定药品质量是可行而必须。     

香蕉林土壤可培养放线菌分离、鉴定及其抑菌活性

【背景】香蕉枯萎病是香蕉的顽固性疾病,制约着香蕉产业的发展,因此,筛选出对香蕉枯萎病菌(尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种,简称Foc4)具有抑制活性的生防菌株具有重要意义。【目的】分离香蕉林土壤样品中放线菌并进行物种的初步鉴定,测定其对包括香蕉枯萎病致病菌的7种病原菌的拮抗活性,获得高活性菌株,以获得解决香蕉枯萎病的生物防治策略。【方法】采集多份广西地区香蕉林土壤样品,采用超声波等手段对其预处理,设置多种特异性培养基从中分离放线菌资源,对获得的放线菌进行基于16SrRNA基因序列的物种鉴定,以7种病原菌为靶标,采用平板对峙法从中筛选抑菌活性菌株,最后采用菌丝生长速率法对Foc4的抑菌率进行测定。【结果】从香蕉林土壤中分离出138株放线菌均为链霉菌,其中5株为潜在新种,分别为X1085、X1052、X2052、X3059和X4046;筛选出具有抑菌活性的菌株77株,阳性率为55.8%。20株对Foc4具有抑制活性,其中4株拮抗效果明显,抑制率大于80%,菌株X4050的抑菌率高达93.76%。【结论】初步明确了香蕉林土壤中可培养放线菌的物种信息,其中部分放线菌为未知物种,活性分析显示一半...     

脊椎动物假基因

假基因(pseudogene)是出现在特定种群基因组中无功能的基因拷贝,在不同的生命形式特别是脊椎动物中较为常见,未加工假基因和加工假基因的产生机制不同,在分子遗传学领域,识别假基因结构和功能有非常重要的作用。     

抗菌肽在洗发液中防腐效能及安全性评价初探

防腐剂是化妆品中防止微生物污染的重要成分。为获得高效防腐且无毒副作用的洗发液防腐剂,实验选取4种抗菌肽进行MIC测定,筛选出针对个革兰氏阴性菌和阳性菌杀菌效果较好的两个抗菌肽N2和NZ2114。通过体外抗菌试验和细胞水平及小鼠皮肤刺激性实验对两种抗菌肽的防腐效果和安全性能进行测定和评估。实验结果表明,N2和NZ2114在低浓度(分别为40和20μg/mL)下即具有快速高效的杀菌效果,并且高浓度(128μg/mL)下,细胞存活率大于85%,具有低细胞毒性。ROS水平和小鼠皮肤刺激性实验证明,N2和NZ2114不会对皮肤细胞造成损伤,并且具有一定程度的抗氧化作用。本实验结果为抗菌肽作为高效安全的洗发液防腐剂提供参考依据。     

非复制型腺病毒携带miR-1的表达诱导肝癌细胞凋亡

miR-1在多种肝癌细胞中被甲基化沉默,导致其下游多个癌基因MET,FoxP1,HDAC4等大量表达,促进了肝癌的增殖.本研究利用非复制型腺病毒Ad-easy携带miR-1（Ad-miR-1）在肝癌细胞PLC/PRF/5和HepG2中过表达miR-1,探讨miR-1抑制肝癌细胞的作用机制.结果表明,肝癌细胞PLC/PRF/5和HepG2中miR-1表达水平极低,感染Ad-miR-1后miR-1表达水平显著上升.肝癌细胞PLC/PRF/5和HepG2感染Ad-miR-1后,MET和FoxP1的mRNA水平和蛋白表达水平被显著下调,细胞凋亡水平显著增加,肝癌细胞的增殖被抑制. 可见,miR-1在肝癌细胞中可能是一个重要的抑癌因子.同时,利用腺病毒载体携带抗癌的microRNA（如miR-1）,也为今后的基因治疗研究提供了一种新方法.     

西瓜花叶病毒HC-Pro基因在毕赤酵母中的分泌表达与功能研究

利用RT-PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因,长度为1371bp,并构建了真核表达质粒pPIC9K-WHC。将重组质粒经SalⅠ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株,经PCR鉴定与G418、MD和MM培养基筛选,获得Mut /His 表型高拷贝转化子。经1%甲醇诱导5d后,SDS-PAGE检测发酵液上清,在66kD处有一特异蛋白条带表达。Western blot鉴定表明,表达蛋白可以和HC-Pro蛋白抗血清发生结合反应。Far-Western blot证明该蛋白能与西瓜花叶病毒CP蛋白结合,支持了HC-Pro蛋白协助传毒的"桥梁"学说。     

西瓜花叶病毒HC-Pro基因在毕赤酵母中的分泌表达与功能研究

利用RT-PCR方法扩增出西瓜花叶病毒HC-Pro的基因,长度为1371bp,并构建了真核表达质粒pPIC9K-WHC。将重组质粒经SalⅠ单酶切后电转化Pichia pastoris GS115菌株,经PCR鉴定与G418、MD和MM培养基筛选,获得Mut⁺/His⁺表型高拷贝转化子。经1%甲醇诱导5d后,SDS-PAGE检测发酵液上清,在66kD处有一特异蛋白条带表达。Western blot 鉴定表明,表达蛋白可以和HC-Pro蛋白抗血清发生结合反应。Far-Western blot 证明该蛋白能与西瓜花叶病毒CP蛋白结合,支持了HC-Pro蛋白协助传毒的“桥梁”学说。     

应用高通量实时荧光定量PCR方法筛选FL细胞对低剂量微囊藻毒素LR暴露的应答基因

微囊藻毒素是蓝藻的一些属产生的单环七肽,在发生水华的水体中普遍存在[1]。含有微囊藻毒素的水华能引起野生动物、鱼类、家畜、家禽等中毒和死亡,也对人类健康构成严重威胁[2,3]。流行病学调查发现,人群原发性肝癌、大肠癌发病率与饮水源中的微囊藻毒素有关[4]。其中微囊藻毒素LR是微囊藻毒素中最常见的一种,因其高急性毒性,强促癌活性而受到广泛的关注。有研究结果表明微囊藻毒素LR可引起多种细胞发生凋亡[5],本实验室先前的研究也发现微囊藻毒素LR能激活在凋亡过程中起重要作用的酶Caspase-3[6],及引起P53、Bax、Bcl-2等凋亡相关蛋白…     

ＣＹＰ２１基因启动子结构功能及突变研究进展

２１羟化酶基因（ＣＹＰ２１基因）缺陷可引起２１羟化酶缺乏。近年对ＣＹＰ２１基因的研究取得了一定进展,本文介绍了该基因启动子区的位置、结构、调节因子,重要功能域及突变等方面的进展,从分子水平进一步加深了对ＣＡＨ的发病机理的了解。     

抗菌肽药物工程化技术研究进展

尽管抗生素在畜牧业疾病防治中的主导地位在短期内不会动摇,但病原菌耐药性形成与快速发展让抗菌肽成为近年新药研发热点之一。作为一种在生物体内广泛存在的天然免疫物质,抗菌肽具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等功能,由于药效短、对蛋白酶敏感、细胞毒性高等缺陷而限制其应用。本文综述了抗菌肽基因工程技术、聚乙二醇(PEG)化、靶向性改造和固定化等工程技术在抗菌肽新药开发中的应用研究进展,以促进抗菌肽产业化。