内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应

内皮抑素与血管内皮细胞抑制因子均为内源性新生血管抑制分子。为了探讨两分子融合后的生物学功能,以重组腺病毒为载体介导融合基因在体内外表达。体外实验表明重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够在ECV304、HepG2、L929等细胞中表达41000大小的融合蛋白,对血管内皮细胞增殖有明显的特异性抑制作用,对HepG2和L929细胞无抑制作用(F=13112.13,P=0.0001)。体内实验表明Ad-hENDO-VEGI151重组腺病毒表达的融合蛋白可以显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管的生成;与AdLacZ对照组相比,Ad-hENDO-VEGI151对兔炎症性角膜新生血管的抑制明显(F=1413.11P=0.0001),免疫组化结果显示,融合蛋白主要在角膜上皮层表达;治疗荷肝癌裸鼠,注射Ad-hENDO-VEGI151的肿瘤体积(487.7±241.2mm3)与AdLacZ对照组(4075.9±1849.9mm3)差异显著(F=14.80P=0.0085),抑瘤率达到88.03%,免疫组化结果显示,胞膜染色阳性,Ad-hENDO-VEGI151组肿瘤的微血管密度30.75±3.31%与AdLacZ组50.25±8.65%差异明显F=17.72P=0.0056抑制率为39%。结果提示:重组腺病毒Ad-hENDO-VEGI151能够表达有生物学活性的融合蛋白,并发挥特异性的新生血管抑制作用。     

绵羊粒细胞集落刺激因子原核表达与提纯及用于颗粒细胞培养的效果

文中旨在研究粒细胞集落刺激因子(Granule cell stimulating factor,GCSF)对绵羊颗粒细胞体外培养过程中细胞增殖和凋亡的影响,明确GCSF对绵羊颗粒细胞生存的调节作用,为今后该蛋白用于羊繁育方面的研究奠定基础。原核克隆表达纯化羊GCSF蛋白,纯化的蛋白用M-NSF60细胞检测生物学活性,将纯化的GCSF添加到颗粒细胞培养基中作为试验组,以培养基中未添加GCSF的细胞为对照,利用Alarmarblue检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。结果表明,羊GCSF可以原核表达并纯化,并且具有生物学活性。在24 h和48 h时,在0.06–600 ng/mL的范围内随着加入GCSF的终浓度增加,细胞活力升高。试验组颗粒细胞体外培养24 h后,与阴性对照相比,细胞周期的分布显著改变,S期细胞比例显著减少(P0.05),G2/M期细胞比例显著增多(P0.05)。试验组凋亡率和对照组相比,48 h检测时凋亡率显著降低(P0.05)。综上表明,GCSF在体外培养的绵羊颗粒细胞中,可调控绵羊颗粒细胞周期,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

燕山山脉软枣猕猴桃的居群结构与动态研究

为探究层间藤本植物软枣猕猴桃（Actinidia arguta）在群落中的生长格局和居群动态变化，以燕山区域内的野生软枣猕猴桃为研究对象，采用样圆法分区域进行了野生软枣猕猴桃的居群结构调查，编制了特定时间生命表并绘制存活曲线。结果表明：燕山区域Ⅰ-Ⅱ径级（幼苗阶段）种群个体分别占总数量的15.39%（东段）、31.25%（中段）和30.76%（西段），总体居群结构呈"倒金字塔"型，种群表现出衰退趋势。调查区域软枣猕猴桃的高度结构基本符合连续发育特征，相对完整。燕山东段和中段的软枣猕猴桃较明显地趋近Deevey-Ⅱ型指数函数模型，燕山西段介于Deevey Ⅰ型与Ⅱ型之间，但更接近Ⅱ型；燕山山脉软枣猕猴桃居群整体呈现衰退型特征。软枣猕猴桃有较高的保护价值，但其居群数量稀少，自然更新能力较弱，种群未来的生长繁衍不容乐观，应加强关注与保护力度。     

长期肾移植受者外周血B淋巴细胞亚群分布特征

摘要 目的：观察移植肾功能稳定的长期受者（>10年）外周血B细胞亚群分布特征及其相关因素。方法：54名肾移植受者接受流式细胞仪检查,测算外周血总B细胞、未转化记忆B细胞、转化记忆B细胞、双阴性B细胞（CD19⁺CD27^-IgD^-）比例及数量（个/微升）。患者均服用包括环孢霉素的免疫抑制治疗。术后时间16.33±5.98年,GFR：91.63±11.28 mL/min/1.73 m²。结果：1长期肾移植患者外周血B细胞中幼稚B细胞最多（37.92% ± 22.06%）,未转化记忆B细胞最少(16.23% ± 11.10%)。B细胞亚群数量与白细胞总数、中性粒细胞比例等相关。2 以上述条件为控制因素行相关分析,转化记忆B细胞比例和GFR相关（r=-0.279,P=0.045）,双阴性B细胞数量和环孢霉素浓度相关（r=-0.300,P=0.029）。线性回归显示双阴性B细胞数目与环孢霉素浓度相关（R²=0.123,P=0.049）。3按GFR将患者分为肾功能减退组（GFR<90 mL/min/1.73 m²,n=19）和肾功能正常组（GFR≥90 mL/min/1.73 m²,n=35）。前者转化记忆B细胞比例显著升高（23.61% ± 10.96% vs.17.48%±8.91%,P=0.030）。按环孢霉素谷浓度将患者分为低浓度组（<64 mmol/L,n=28）和高浓度组（≥64 mmol/L,n=26）,前者双阴性B细胞数量显著升高（13.74±10.70 vs. 8.14±6.72/μL,P=0.027）。转化记忆B细胞比例与GFR分组相关（r=-0.326,P=0.018）,双阴性B细胞数量和环孢霉素浓度分组相关（r=-0.350,P=0.01）。结论：移植肾功能稳定的长期存活受者（>10年）外周血幼稚B细胞较多。转化记忆B细胞增多与移植肾功能减退相关,增多的双阴性B细胞和低孢霉素浓度治疗相关。     

球磨-CTAB法提取嗜酸乳杆菌基因组DNA条件优化

[目的]以嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)为试验菌株,寻找一种高质量、高稳定性的细菌基因组DNA的提取方法。[方法]采用球磨-十六烷基三甲基溴化铵(Cetyltrimethyl ammonium bromide,CTAB)法提取细菌基因组DNA,通过调整研磨珠直径、菌体量、破碎时间三因素对DNA提取效果进行正交优化。[结果]确定最佳优化条件为破碎时间3.5 min、菌体量9×10~8CFU/m L、研磨珠直径0.1 mm。[结论]经条件优化后的球磨-CTAB法短时间内可获得高质量的细菌DNA产品,处理量大、方便快捷。     

基于Maxent模型的软枣猕猴桃在中国潜在适生区预测

软枣猕猴桃Actinidia arguta是猕猴桃科Actinidiaceae猕猴桃属Actinidia大型落叶藤本,据《中国植物志》记载,该物种在中国从最北的黑龙江岸至南方广西境内的五岭山地都有分布,但尚未明确其适宜分布区域。因该物种具有独特的食用和药用价值,近年来其种群数量急剧减少,现已被北京市、河北省、吉林省等列为地方性保护物种。本文利用Maxent模型对软枣猕猴桃在中国的潜在适宜分布区进行了预测并对其分布适宜性进行评价。研究结果表明:软枣猕猴桃在我国的适宜分布区总面积约为3.01×10~(6 )km~2;其高适生区主要集中在四川中部、陕西南部、湖北西部和贵州西北部等地中低山区地带,呈圆环状分布。其中软枣猕猴桃在云南、四川、陕西等省份的潜在高适生区域面积最大。利用Jackknife刀切法计算得到影响软枣猕猴桃分布的主要环境因子为最湿季度降水量(500—800 mm)、年均温(12.5—17.5℃)、最冷季度降水量(290—660 mm)和海拔(2000—2690 m),上述环境因子的累计贡献率为79.7%。建议在中高度适宜分布区进行野生软枣猕猴桃的迁地保护和人工种植,并根据其适生环境调整软枣猕猴桃的农业种植繁育规划,为软枣猕猴桃的就地、迁地保护提供了理论依据。     

燕山山脉黄檗种群结构与动态特征

黄檗（Phellodendron amurense）为我国珍稀濒危物种，具有较高的药用价值。以燕山地区野生黄檗种群为研究对象，采用典型抽样对8个保护区内的黄檗进行全面调查，通过编制静态生命表并绘制存活曲线，分析种群年龄结构和种群变化规律，并通过种群动态量化和时间序列预测分析种群未来数量变化。结果表明：（1）黄檗种群结构总体上呈倒"J"型，但存在外部干扰时，种群结构数量变化动态指数为1.017%，表明该种群趋于稳定型；（2）静态生命表及相关曲线分析显示，黄檗种群存活数量整体上随着径级增大，个体数量逐渐下降；黄檗种群的生存期望在不同径级间存在波动，而第Ⅶ径级的生存期望最高，种群存活曲线符合Deevey-Ⅱ型，黄檗种群具有前期减少、中期稳定、后期衰退的特点；（3）时间序列预测分析表明，在未来2、4、6、8个径级之后，黄檗中老龄个体数量将逐渐增加。黄檗种群濒危的主要因素是幼苗数量少，且呈现散生分布状态，建议加强幼苗抚育工作，提高幼苗的存活率，保护和改善生境，从而促进黄檗种群的自然更新和恢复。