四个达摩凤蝶新孵幼虫细胞系的建立及其生物学特性

【目的】建立达摩凤蝶 Papilio demoleus Linnaeus新孵幼虫细胞系,并对其生物学特性进行研究。【方法】使用改良配方的Grace培养基并辅以20%胎牛血清,通过原代和传代培养建立达摩凤蝶新孵幼虫细胞系。通过显微观察、细胞活力分析、核型分析和分子鉴定,获得4个新建细胞系的生物学特性数据。使用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(AcMNPV-SEAP)。使用有限稀释法测定达摩凤蝶细胞系对AcMNPV-SEAP的半数组织培养感染剂量(TCID₅₀), 比较达摩凤蝶细胞系对AcMNPV-SEAP的敏感性。【结果】建立了4个贴壁生长的达摩凤蝶新孵幼虫细胞系(RIRI-PaDe-1, RIRI-PaDe-2, RIRI-PaDe-3及RIRI-PaDe-4),且均传至60代以上。形态学方面,细胞系RIRI-PaDe-1和RIRI-PaDe-4较为相近,均由圆形、梭形以及多边形细胞组成,细胞系RIRI-PaDe-2主要为圆形细胞,而RIRI-PaDe-3主要为类似表皮细胞和纤维状细胞。细胞增殖动力学方面,4个细胞系的群体倍增时间分别为69.77, 67.42, 81.48及65.43 h。核型分析显示4个细胞系染色体数量均呈正态分布,其中RIRI-PaDe-2, RIRI-PaDe-3以及RIRI-PaDe-4的染色体数目分布区间比较接近,在45~97条之间,RIRI-PaDe-1的染色体条数相比偏少,在36~90条之间。通过比对4个达摩凤蝶细胞系和虫卵的细胞色素c氧化酶亚基I(COI)基因序列,证明4个新建细胞系来源于达摩凤蝶组织。比较4个细胞系对AcMNPV-SEAP敏感性发现RIRI-PaDe-3对此病毒较为敏感,可作为重组杆状病毒表达的宿主。【结论】虽然4个新建达摩凤蝶细胞系的来源相同,具有相同的遗传背景,但其生物学特征仍有明显差异,具有进一步研究的价值。     

中国汉族人群长寿老人TERT基因MNS16A长度多态研究

近期研究表明,TERT基因中的一个串联重复长度多态MNS16A可以调节端粒酶的活性.以往研究报道,端粒酶的活性决定端粒长度从而与个体的寿命相关,据此提出假设:MNS16A的多态可能通过控制端粒长度从而影响人类的寿命.为验证该假设,本实验室从四川省都江堰市收集了446个相互没有亲缘关系的长寿老人(年龄≥90岁,平均年龄(94.45±3.45)岁),同时收集了332个正常个体作为对照组(年龄22~53岁,平均年龄(35.00±12.00)岁).检测长寿组和对照组的MNS16A长度多态,并将两组人群的MNS16A等位基因频率和基因型分布通过卡方检验进行分析.结果表明,在长寿组和对照组之间,MNS16A等位基因频率和基因型分布没有显著差异,表明MNS16A的长度多态在中国汉族人群中可能对寿命长度没有显著影响.     

双斑蟋营养成分分析及评价

由于具有较好的营养价值以及较高的食物转化效率,食用昆虫特别是蟋蟀受到普遍关注。在双斑蟋（Gryllus bimaculatus,GB）营养成分测定的基础上,对比家蟋（Acheta domesticus,AD）和黑蟋（Gryllus testaceus,GT）的营养及含量,分析评价了双斑蟋的使用价值。结果显示：双斑蟋水分含量71.0%、粗蛋白含量58.60%（干重）、粗脂肪含量28.90%（干重）、粗纤维含量7.23%（干重）、灰分4.93%（干重）;蛋白含量与黑蟋相当而高于家蟋,粗脂肪和灰分含量要高于家蟋和黑蟋;双斑蟋含有17种氨基酸,总氨基酸含量51.03%（干重）,必需氨基酸含量24.76%（干重）、占总氨基酸的48.3%,氨基酸含量低于其他两种蟋蟀;双斑蟋中常量元素含量最高的为钾（6 416 mg/kg,干重）、含量最低的是钙（92 mg/kg,干重）,微量元素中锌含量较高（241 mg/kg,干重）;双斑蟋油脂中不饱和脂肪酸的相对含量为65.33%,以亚油酸（37.05%）和油酸（25.86%）为主、饱和脂肪酸以棕榈酸（25.44%）和硬脂酸（8.74%）为主。双斑蟋的脂肪酸组成、含量与家蟋相近,而与黑蟋的脂肪酸组成差别较大,三种蟋蟀中含量最高的饱和脂肪酸为棕榈酸,而含量最高的不饱和酸为亚油酸。结果表明,双斑蟋的必需氨基酸组成符合FAO/WHO推荐的氨基酸构成比例的蛋白条件,具有较高的营养价值和食用价值。     

水生昆虫对汞的吸收、富集和水-陆转移

汞是一种人体非必需且有毒的重金属元素,全球性的汞污染因对人类健康具有损害而备受社会关注。自然界中的汞绝大部分会通过江河径流和雨雪尘土的沉降而进入水生生态系统,每年进入水生生态系统的汞至少有10 000吨。水生昆虫作为重要的消费者生物存在于水生生态食物网中,是其重要的组成部分,在水生生态系统的物质循环中扮演着重要角色。本文介绍了近年来水生昆虫与汞之间的相关研究,重点总结了水生昆虫对汞的吸收和富集程度,分析了水生昆虫在汞的水-陆转移中的作用。研究数据表明,水生昆虫对汞的吸收程度与环境因素有关,并通过不同的途径转移到陆地生态系统中,对陆地生态系统上层食物链的生物存在一定的威胁,同时也需注意在对水生昆虫进行开发利用的同时,考虑汞是否超标的因素。     

三种食物喂养的黑水虻幼虫营养测定与比较

黑水虻幼虫在国内外被普遍用于处理有机废弃物,得到的黑水虻幼虫由于富含蛋白质又可用于畜禽养殖,或用于提取油脂、蛋白及甲壳素等物质.本文利用云南省昆明市宜良县汤池镇当地较多的有机废弃物(豆腐渣、鸡粪及发酵鸡粪)饲养黑水虻幼虫,15d后,对三种幼虫进行营养测定,并比较不同食物饲养幼虫营养成分的差异,可根据测定结果对不同用途幼虫选择较合适的饲养物质.结果表明豆腐渣饲养幼虫的蛋白(52.3％)、油脂(22.6％)及氨基酸(36.80％)含量均高于两种鸡粪饲养的幼虫(蛋白含量为46.9％及45.9％、油脂为5.13％及4.30％、氨基酸为23.51％及28.48％),灰分(9.89％)含量低于这两种鸡粪饲养的幼虫(23.2％及19.6％);两种鸡粪饲养的黑水虻幼虫中锌、铜及铅等部分金属元素含量较高.三种食物饲养的黑水虻幼虫营养成分存在一定差异,其中豆腐渣饲养的黑水虻幼虫营养较为丰富,且重金属含量较低,更适合用于畜禽养殖.     

一种新的食用蜻蜓种类的分子鉴定

蜻蜓是一类营养丰富且具有药用保健价值的可食用昆虫。目前蜻蜓在国内被食用的种类见诸报道的有红蜻(Crocothemis servilia)、角突箭蜓(Gomphus cuneatus)、舟尾丝蟌(Lestes praemorsa)、闪蓝丽大蜻(Epophthalmia elegans)、碧伟蜓(Anax parthenope julius)、小团扇春蜓(Ictinogomphus rapax)、大团扇春蜓(Sinictinogomphus clavatus)、黄蜻(Pantala flavescens)、赤褐灰蜻(Orthetrum pruinosum)、白尾灰蜻(Orthetrum albistylum)、异色灰蜻(Orthetrum triangulare melania)、大黄赤蜻(Sympetrum uniforme)共12种。笔者在来自云南红河州元阳县大坪乡的待食用蜻蜓稚虫中发现一种体型较小的蜻蜓种类,从形态上初步判断不属于以上12种,通过DNA条形码分子鉴定法对这种蜻蜓进行了种类鉴定,结果该种蜻蜓为黄基赤蜻(Sympetrum speciosum),由此食用蜻蜓报道的种类又增加了一种。     

六种食用蜻蜓稚虫营养成分分析和评价

以云南省和贵州省采集到的6种常见食用蜻蜓为材料,采用凯氏定氮法、索氏提取法、蒽酮比色法、氨基酸自动分析法、原子吸收法、电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)和高效液相色谱法(HPLC)法分别测定了6种蜻蜓稚虫的基本营养组成、氨基酸、矿质元素和脂溶性维生素的含量,评价其营养价值。结果显示,6种蜻蜓稚虫平均水分含量为81.17%,干基蛋白质、脂肪、糖和灰分的平均含量分别为65.62%,9.80%、3.01%和5.47%,氨基酸组成合理,符合WHO/FAO提出的优质蛋白条件,主要限制性氨基酸为Met+Cys和Trp,与全鸡蛋蛋白质贴近度为0.59~0.66。富含各类人体必需矿质元素,尤其是Ca和Se,脂溶性维生素中分别测定出0.252~3.859mg·kg~(-1)的α-生育酚,具有高蛋白、低脂肪、氨基酸组成合理和富含矿质元素的特点,营养价值较高,具有开发利用前景,但需注意部分种类体内检测出重金属元素超标。     

云南食用蜜蜂种类调查及鉴定

在云南,人们有食用蜜蜂幼虫和蛹的习俗。市场上销售的蜜蜂幼虫和蛹多经热水烫过或煮过,因而缺少成虫形态,俗名易混用,食用种类长期未予明确。本文在市场调查的基础上,收集其中部分样品,通过形态学和mtDNA的COI基因部分序列初步鉴定其分类地位,以明确食用种类。结果表明,云南蜜蜂的食用集中在横断山脉南部地区,接受人群广泛,食用方式多样;云南食用本地分布的全部5种野生蜜蜂,包括东方蜜蜂(Apis cerana)、小蜜蜂(A.florea)、大蜜蜂(A.dorsata)、黑大蜜蜂(A.laboriosa)和黑小蜜蜂(A.andreniformis);基于COI序列构建的邻接法(NJ)和最大简约法(MP)系统发育树支持现有的蜜蜂属系统发育关系;现有的食用蜜蜂大多采集自野外,亟待开展遗传资源保护。本研究为食用蜜蜂的鉴定提供了数据支持,也为蜜蜂自然资源的利用和保护提供参考。     

药用昆虫神农洁蜣螂炮制品DNA条形码序列的测定与分析

当药用昆虫被加工炮制成碎块或粉末状态时,其昆虫类别和真伪的鉴别就显得十分困难。未经准确鉴定的药用昆虫会影响临床用药安全。为寻找准确、灵敏且快速的检测方法,采用DNA条形码技术,分别以药用神农洁蜣螂(Catharsius molossus)炮制品药材的完整和破碎个体为研究材料,对其mtCOI基因进行提取、扩增及测序分析,探讨DNA条形码技术对炮制后药用蜣螂鉴定的可行性。通过对不同DNA提取方法的比较,成功从炮制后干燥药材虫体内提取出总DNA并扩增出mtCOI基因片段。测序分析结果表明mtCOI基因序列能够区分神农洁蜣螂和其形态近似种。作为药用神农洁蜣螂DNA条形码标准片段的mtCOI基因序列已投递至GenBank。研究还表明,碎块状药用蜣螂药材中混杂有一定比例的其他昆虫。该结果有助于建立适合加工炮制后药用蜣螂的DNA条形码分子鉴定标准,并为保证临床用药安全提供支持。     

昆虫孤雌生殖起源的遗传机制和进化意义

孤雌生殖在昆虫纲中有很高的发生比例,昆虫的孤雌生殖能力是造成农林灾害的一个重要而常被忽视的因素.孤雌生殖物种的存在和维持在进化生物学领域是个令人困惑的话题.在一些物种中孤雌生殖的细胞学机制得到了研究和解释,但是对于从两性生殖转换到孤雌生殖的遗传机制却知之甚少.了解孤雌生殖起源的遗传机制和进化意义对于预防农林虫害有着重要的意义.因此,该文就近年来对昆虫孤雌生殖起源的遗传和进化意义的研究做以综述,并就可能的利用前景进行简单讨论.