露花叶片PEP羧化酶的纯化及某些分子特性

经硫酸铵分部沉淀,DEAE-纤维素(DE52),DEAE-Sephadex A-50,SephacrylS-200和二次羟基磷灰石等柱层析,从露花叶片中分离得到纯化63.9倍、电泳均一的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。此酶的天然分子量经聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测定为260kD,经SephadexG-200凝胶过滤法测定为240kD。用SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得酶的亚基分子量为115kD,表明此酶是个二同聚体。此酶的等电点为PI=5.6。免疫双扩散的结果表明此酶与高梁PEPG的抗原决定簇呈部分同一性。     

干旱影响露花叶片PEP羧化酶蛋白合成的同位素证据

After drought treatment, marked increase in quantity of PEPcarboxylase protein in the leaves of M. cordifolium, an inducible CAM plant, was shown by SDS-PAGE and western immunoblot (Fig. 1). Further investigation with incorporation of L-[~(35)S] methionine into leaf discs and immunoprecipitation revealed that de novo synthesis of PEP-carboxylase protein was responsible for this increase (Fig. 2).     

水分胁迫对露花叶片中PEP羧化酶活性及其调节特性的影响

水分胁迫期间露花叶片中PEP羧化酶的活力随胁迫时间的延长明显增加,复水后PEPC同工酶的活力下降。从露花叶片中分离到3个具有不同动力学和物理学特性的PEPC同工酶(PCⅠ,PCⅡ,PCⅢ),其中同工酶PCⅠ只存在于水分胁迫下露花叶片中,复水后消失。 这3个同工酶的K_m(PEP)值不相同;PCⅠ的K_m(PEP)值介于PCⅡ与PCⅢ之间,它在PAGE上的相对迁移率(Rm)比PCⅡ和PCⅢ大,对效应剂G—6—P及Mal的反应不敏感,分子量为PCⅡ之半;PCⅡ被G—6—P激活和被Mal抑制的程度介于PCⅠ与PCⅢ之间,它在PAGE上的相对迁移率和分子量与PCⅢ极相近。     

水稻焦磷酸:D-果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶α亚基的cDNA克隆及表达

F。。PZ（果糖一2,6一二磷酸）是真核生物中广泛存在的小分子代谢调节物,而PFP则是它的一个广泛存在于植物组织中的重要靶酶（Stilt1990）。该酶在80年代初被发现并为植物生化界所重视。它催化下列可逆反应：F。P＋PPi-Fl,。PZ＋Pi。此酶既可在酵解或生糖作用中催化形成净碳流（Hatzfeld等1989）,也可以与PFK或F;,6Pase形成循环催化PPi的产生和消除（Sung等1988）。许多植物的urn由a和P两种亚基组成（Botha等1988,Yan和Tao1984）。其中a亚基为调节亚基,与F。,。PZ对催化活性的调节有关;卢亚基为催化亚基,具有活性位…     

干旱过程中露花叶片PEPCase酶蛋白量的变化

干旱和盐胁迫使露花叶片中PEPCase活性水平提高数倍。经双相电泳和蛋白免疫印溃(Western immunoblot)发现干旱后露花叶片中PEPCase蛋白量有明显增多。火箭免疫电泳定量分析结果表明,干旱过程中,PEPCase活性水平的提高主要基于其酶蛋白量的增加。干旱引起的这些变化是可逆的,在恢复供水一定时间后可以完全恢复。RubisCO蛋白量在干旱处理的露花叶片中明显减少,恢复供水后又回复到原初水平。PEPCase蛋白量增多,RubisCO蛋白量减少可能是露花叶片CAM途径诱导的生化特征之一。露花叶片中PEPCase活性水平及蛋白量受到叶片发育状况的控制,干旱引起的这两者的变化在中部成熟叶片中最明显,在幼嫩叶片中最小。