牛副流感病毒3型HN基因原核表达及间接ELISA方法建立

用构建的HJ-1株牛副流感病毒3型HN基因原核表达载体pQE30-HN,在E.coli XL1Blue中表达了重组HN蛋白,并用电洗脱方法从电泳凝胶中纯化了该重组蛋白作为包被抗原,建立了检测该病毒抗体的ELISA方法。建立的ELISA最佳工作条件分别是:抗原浓度为6μg/mL,血清稀释度为1∶50,封闭液为5%脱脂奶粉,封闭条件为37℃60min,酶标抗体工作浓度为1∶10 000;阳性临界值为OD450≥0.30。该方法与病毒中和试验符合率高达96%,板内和板间重复性试验变异系数均小于10%,重复性较好。该方法与牛冠状病毒、传染性鼻气管炎病毒和呼吸道合包体病毒阳性血清无交叉反应。应用该方法检测黑龙江省部分地区323份奶牛血清样本,对牛副流感病毒3型抗体血清阳性率为57.89%。该ELISA方法的成功建立为进一步研发ELISA试剂盒提供了技术基础。     

牛化脓性隐秘杆菌病PCR诊断方法的建立

近几年犊牛化脓性肺炎发病率逐年升高, 经检测该病原以化脓性隐秘杆菌为主, 研究建立快速检测化脓性隐秘杆菌的PCR诊断方法。根据化脓性隐秘杆菌16S rRNA基因设计并合成一对特异性引物, 对PCR条件进行优化后通过特异性试验和敏感性试验检测其特异性和敏感性。扩增出927 bp目的基因, 最佳引物浓度为0.2 μmol/L、退火温度58°C、Mg2+浓度1.5 mmol/L, 特异性试验结果表明化脓性隐秘杆菌参考菌株能扩增出927 bp目的基因, 而大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、化脓链球菌、蜡样芽孢杆菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯氏菌和变形杆菌等的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明, PCR的最低检出量为42个化脓性隐秘杆菌。建立的牛化脓性隐秘杆菌的PCR诊断方法, 具有较高的特异性和敏感性, 为化脓性隐秘杆菌引起的牛化脓性肺炎的快速诊断及流行病学调查提供了新的手段。     

三红妇康精对大鼠免疫功能的影响

三红妇康精按７．５ｇ／ｋｇ剂量给大鼠灌喂,每天１次,连续１０天,可明显提高大鼠外周血酸性α－醋酸萘酯酶阳性淋巴细胞的百分率和大鼠脾特异性玫瑰花环形成细胞的比率,但对大鼠外周血中性白细胞吞噬率无明显影响。提示三红妇康精有提高机体细胞免疫和体液免疫功能的作用。