II型猪圆环病毒检测试剂盒的研制

猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)属圆环病毒科圆环病毒属成员[1]。PCV分两种血清型,即PCV 1 和 PCV 2,其中 PCV 1 由 Tischer 等[2] 于1974年检测到,对猪没有致病性;PCV 2 可引起部分断奶仔猪和育肥猪的断奶仔猪多系统综合征( postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)[3]。目前,该病呈世界分布,给养猪业造成巨大的经济损失。本研究通过分析已发表的 PCV 2的基因序列,找出 PCV 2 的特异性片段,研制了检测PCV 2的试剂盒。检测临床疑似病料,结果表明该试剂盒使用方便、快速、敏感、特异,符合国内的养殖场…     

用荧光标记O-I噬菌体快速检测食品源沙门氏菌

[目的]利用O-I噬菌体几乎可裂解沙门氏菌属细菌的特性建立快速检测食品中沙门氏菌的方法.[方法]用核酸荧光染料SYBR gold染料标记O-I噬菌体侵染100株试验菌及120份食品样品菌,荧光显微镜鉴定沙门氏菌;并测灵敏度.[结果]100株试验菌中40株沙门氏菌可见杆状荧光,而10株变形杆菌、20株志贺氏菌、20株大肠杆菌和10株葡萄球菌均无荧光;沙门氏菌检测灵敏度达10 CFU/100 μL;120份食品样品中沙门氏菌的O-I噬菌体检测与生化鉴定结果的阳性率分别为9.17%和10%,符合率为91.7%.[结论]试验表明用荧光标记的O-I噬菌体可以快速、直观、准确、大量地检测食品中沙门氏菌.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒实时PCR检测方法的建立

设计合成了一套引物和TaqMan探针,以扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒的核衣壳蛋白基因,通过反应条件的优化,在国内首次建立了快速定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的实时PCR方法,并用该法检测患病猪的肺脏等样品.结果表明该方法具有较好的特异性和重复性,对PRRSV细胞培养物的检测下限为0.01TCID50,敏感性比常规RT-PCR高100倍;对10份PRRS疑似猪肺脏样品检测5份为阳性,与病毒分离的阳性符合率为100%.该方法具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,在PRRSV的早期检测、预防控制、进出口检疫及基础研究中会起到重要作用.     

动物园大型猫科动物犬瘟热的免疫监测

虎、狮、豹等大型猫科动物可发生犬瘟热(CD),有必要进行预防。采取某动物园未免疫的东北虎、非洲狮、猞猁血样,用中和试验检测,结果显示这些动物的犬瘟热病毒(CDV)抗体水平均小于1:5。用CD弱毒疫苗接种以上动物,幼龄动物免疫14d逐步产生抗体;成年动物体内抗体水平在两月内迅速升高,并维持在1:64以上,9～11个月后逐步下降,加强免疫后抗体又迅速升高至≥1:112。该疫苗对所有接种的动物均安全可靠。白化的孟加拉虎接种疫苗后不能产生CDV中和抗体。     

Ⅱ型猪圆环病毒PCR检测方法的建立及试剂盒的研制

根据Cenbank上已发表的Ⅱ型猪圆环病毒（PCV-2）的基因序列,设计并合成一对能特异性扩增Ⅱ型猪圆环病毒的引物,通过对PCR方法的优化,建立了PCR方法检测PCV-2并研制出试剂盒。然后对试剂盒的敏感性、特异性和有效期进行了研究。结果表明,该试剂盒具有很好的特异性和敏感性,有效期在-20℃至少可以保存一年。     

动物园大型猫科动物犬瘟热的免疫监测

虎、狮、豹等大型猫科动物可发生犬瘟热(CD),有必要进行预防.采取某动物园未免疫的东北虎、非洲狮、猞猁血样,用中和试验检测,结果显示这些动物的犬瘟热病毒(CDV)抗体水平均小于15.用CD弱毒疫苗接种以上动物,幼龄动物免疫14d逐步产生抗体;成年动物体内抗体水平在两月内迅速升高,并维持在164以上,9～11个月后逐步下降,加强免疫后抗体又迅速升高至≥1112.该疫苗对所有接种的动物均安全可靠.白化的孟加拉虎接种疫苗后不能产生CDV中和抗体.     

Ⅱ型猪圆环病毒检测试剂盒的研制

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属圆环病毒科圆环病毒属成员。PCV分两种血清型,即PCV-1和PCV-2,其中PCV-1由Tischer等于1974年检测到,对猪没有致病性;PCV-2可引起部分断奶仔猪和育肥猪的断奶仔猪多系统综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,     

Ⅱ型猪圆环病毒检测试剂盒的研制

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属圆环病毒科圆环病毒属成员[1].PCV分两种血清型,即PCV-1和PCV-2,其中PCV-1由Tischer等[2]于1974年检测到,对猪没有致病性;PCV-2可引起部分断奶仔猪和育肥猪的断奶仔猪多系统综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)[3].目前,该病呈世界分布,给养猪业造成巨大的经济损失.本研究通过分析已发表的PCV-2的基因序列,找出PCV-2的特异性片段,研制了检测PCV-2的试剂盒.检测临床疑似病料,结果表明该试剂盒使用方便、快速、敏感、特异,符合国内的养殖场及进出口的需要.     

马西尼罗热病毒E蛋白部分基因在大肠杆菌中的表达

参考GenBank发表的西尼罗病毒(west nile virus,WNV)的E蛋白基因序列,自行设计合成一对引物,利用RT-PCR扩增出了WMV E基因318bp片段,将其克隆入pMD18-T-Vector载体中,阳性克隆命名pMD-E,并进行序列分析。进一步亚克隆入表达载体pET-32a( )。重组质粒pET32a-E转化BL21(DE3)感受态细胞中表达,表达产物经SDS-PAGE可检测到分子量约为32kD的目的蛋白带,经薄层扫描分析,目的蛋白占菌体总蛋白的33．1%。表达产物纯化后,Wester-blotting分析证明表达产物能被WNV的阳性血清所识别,为下一步建立以表达产物为包被抗原建立检测马的WNV的ELISA方法打下了基础。     

牛BVDV C_(24)V株P80蛋白在大肠杆菌中的高效表达

根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)P80基因序列,自行设计并合成引物,经过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从BVDV C_(24)V株细胞培养液中扩增出P80基因,大小为560bp。利用酶切方法把目的基因克隆到大肠杆菌IPTG诱导表达载体PET32a(+)中,在大肠杆菌中得到了高效表达,这为建立ELISA方法检测BVDV抗体奠定了基础。