分子标记辅助改良杂交稻协优57及其父母本的蒸煮食味品质

协优57是一个产量高和适应性强的杂交中籼组合,但由于其父母本直链淀粉含量（AC）高,导致杂交稻米的AC较高、蒸煮食味品质较差。先前利用PCR-AccⅠ分子标记辅助选择对协优57的亲本057[恢复系,记作057（GG）]和协青早A[不育系,记作协A（GG）]的W x基因进行改良。利用改良前、后的各亲本分别配组,分析不同组合的AC、食味品质和颗粒性淀粉结合酶（GBSS）活性。结果表明,改良单亲的GT型组合协A（GG）×057（TT）、协A（TT）×057（GG）杂交稻米的AC由原组合协A（GG）×057（GG）的28%分别降到19.9%和19.3%,但均一性较差。改良双亲的TT纯合型组合协A（TT）×057（TT）的杂交稻米,不仅AC降到中等偏低水平（13.1%）,而且AC的均一性也有了很大的提高,蒸煮食味品质明显改善。GBSS活性分析表明：三种W x基因型的GBSS活性总体表现为GG〉GT〉TT。     

60Co辐照对水稻基因组DNA诱变的分子生物学效应

以水稻品种农林8号及其60Co γ射线辐照突变体农林8号m为研究材料,选用360个10碱基寡核苷酸随机引物,利用随机扩增多态性DNA标记技术筛选出1个引物OPG18在农林8号和农林8号m之间表现出共显性的多态性.通过对该共显性标记的克隆和序列分析表明,突变体农林8号m与农林8号相比有29 bp DNA片段的缺失.研究结果为60Co γ射线辐照导致植物基因组DNA缺失提供了一个最直接明确的证据.     

实时荧光PCR技术定量检测转Bt基因水稻的研究

以转Bt基因的"克螟稻"为研究材料,通过使用特异的引物和荧光标记探针,以已知转基因成份含量的水稻样品为模板建立标准曲线,对转基因水稻的NOS和Bt外源基因进行了荧光定量检测分析.初步建立了转基因水稻定量检测的技术方法.     

PCR反应混合液的冻干处理及其应用

本研究将除模板DNA以外的PCR反应混合液,经过真空浓缩冻成干粉状后,分别置于室温和4℃贮存,经过一定的贮藏时间后进行PCR反应,发现经冻干处理的样品能在较长的贮存时间内保持扩增活性,这将给实际工作带来很大的便利。 Abstract:In this paper we introduce a new storage method of PCR ingredient.PCR mixture except DNA template has been frozen to dry powder by the DNA-Plus system.This kind of powder was stored at room temperature or 4℃.PCR has been run in different period of storage.It was discovered that the samples of lyophilization could keep activity for a long time.     

适于蛋白双向电泳的水稻叶片样品提取方法初探

在水稻基因组测序完成后,利用蛋白质组学技术揭示水稻基因功能的研究,已成为水稻分子生物学研究的热点之一。水稻叶片作为DNA研究的便利材料被经常使用,但对蛋白质研究来说,占叶片全蛋白50%～60%的核酮糖二磷酸羧化酶（RuBP羧化酶）对低丰度蛋白常常造成掩盖。以水稻叶片为材料,用不同浓度的聚乙二醇（PEG）去除叶片中RuBP羧化酶。通过SDS-PAGE垂直电泳比较发现,浓度为17%的PEG对去除RuBP羧化酶效果最好,所获得的蛋白质样品可以得到质量较高的双向电泳图谱。     

60Co辐照对水稻基因组DNA诱变的分子生物学效应

以水稻品种农林8号及其⁶⁰Co γ射线辐照突变体农林8号m为研究材料,选用360个10碱基寡核苷酸随机引物,利用随机扩增多态性DNA标记技术筛选出1个引物OPG18在农林8号和农林8号m之间表现出共显性的多态性.通过对该共显性标记的克隆和序列分析表明,突变体农林8号m与农林8号相比有29 bp DNA片段的缺失.研究结果为⁶⁰Co γ射线辐照导致植物基因组DNA缺失提供了一个最直接明确的证据.     

水稻苯达松敏感致死基因的RAPD标记和SCAR标记

利用RAPD技术对水稻品种农林8号(含苯达松抗性基因Ben)和其突变体农林8号m (含苯达松敏感致死基因ben)进行标记,从360个10 bp寡核苷酸随机引物中筛选出5个引物产生的7个RAPD标记.经对多态性标记的克隆和序列分析,再设计PCR引物,将其中4个RAPD标记OPG18/943、OPG18/972、OPD10/1248和OPF03/1198转化成SCAR标记SCAR/G18/883、SCAR/G18/890、SCAR/G18/919/948、SCAR/D10/1237、SCAR/F03/1186.通过对农林8号×农林8号m F2分离群体320个单株的连锁分析及在1对含ben基因的近等基因系H121和Hben121中验证,标记SCAR/G18/883、SCAR/G18/890、SCAR/G18/919/948与Ben 或ben基因共分离,SCAR/D10/1237与Ben基因的遗传距离为(14.8±2.1) cM.经Southern blotting分析并结合F2代分离比例表明,标记OPG18/943、OPG18/972及其转化的SCAR标记在基因组中为单拷贝序列,且OPG18/943和OPG18/972为一对等位STS位点.这是首次报道与ben或Ben基因相连锁的分子标记.本研究为利用分子标记辅助ben基因的转育及利用图位克隆技术分离ben基因提供了有用的分子标记.     

野败型水稻保持系线粒体特异DNA片段的克隆及序列分析

利用RAPD技术,从水稻野败型细胞质雄性不育系珍汕97A的保持系珍汕97B中得到一个特异的扩增片段PWP-13。该片段全长808bp,1-142区段为正常的cob基因片段;143-372、406-707区段与一个报告的嵌合cob基因的同源性分别为98％、100％,但由于碱基缺失,所推测的氨基酸序列差异较大;373-405区段为PWP-13所特有的重复序列,708-808区段为未知序列。序列内含有3组长度分别为9、31、27bp的小重复序列。     

小麦叶片直接用于PCR和RAPD反应的方法

本研究以经过碱处理的小麦叶片直接作为PCR和RAPD反应的模板,并应用于小麦转基因目标性状的跟踪检测、品种多态性分析等方面。该方法具有快速、简便等特点,尤其是在受测群体较大时,此种方法更显得经济有效。 Abstract:In this paper we introduce a new method of PCR and RAPD reaction by using a small quantity of wheat leaf tissue with alkali treatment.It can be used either to detect target gene or to analyze polymorphism of wheat varieties.This method is simple and reliable,especially for a large-scale detection.     

水稻线粒体DNA中与雄性不育有关特异片段的克隆及序列分析

该项研究利用RAPD技术,对野败型,矮败型和BT型细胞质雄性不育系,保持系,基因组DNA进行PCR扩增,分离到6条不育系特有的扩增片段,并对野败型,矮败型不育系共有的片段进行了Southern分析,DNA序列分析和SCAR验证,该片段全长1879bp,包含6个开放阅读框架和8对重复序列,BLAST分析表明,该片段部分区域与Elytrigia elongata,小麦线粒体tRNA-Asp基因上游一段序列同源,并对该片段在线粒体DNA中的可能位置等进行了讨论。