蛇白蔹白藜芦醇合酶基因CNRS2的克隆与原核表达

白藜芦醇合酶(resveratrol synthetic enzyme,RS)是植物白藜芦醇合成途径中的关键酶,利用已知的葡萄RS基因(AF274281)序列设计并合成了一对引物,以蛇白蔹基因组DNA为模板,PCR扩增得到包含RS完整基因在内的一段序列,测序与序列分析表明:该克隆片段全长1 536bp,其中包含一个内含子及两个外显子。采用悬挂延伸PCR法克隆了目的基因,命名为CNRS2。序列分析表明该基因的开放读码框1 170 bp,编码389个氨基酸残基。同源性比较发现,CNRS2与已知葡萄RS基因序列的同源性达93%～98%。CNRS2与pET-30a(+)构建原核表达载体,经IPTG诱导后可表达获得相对分子量约为46 kD的外源融合蛋白。以上结果证实CNRS2属葡萄RS基因家族成员,为今后进一步对该基因的研究利用打下基础。     

甜菜属厚皮菜SWTY-1细胞质VNTRs多态性分析

利用数目可变串联重复序列(Variable Number of Tandem Repeats,VNTRs)微卫星标记方法,对重庆厚皮菜甜菜材料SWTY-1群体中100个单株的细胞质线粒体DNA片段中TR2位点VNTRs片段多态性进行分析。结果显示97个单株线粒体TR2位点微卫星串联重复序列均为3拷贝,与普通糖甜菜一致;3个单株线粒体TR2位点微卫星串联重复序列为6拷贝,发现甜菜属厚皮菜细胞质TR2位点VNTRs存在多态性,在该群体中发现了不同于甜菜栽培种新的细胞质单株。对该群体材料100个单株的抽薹及结籽进行观测,结果显示微卫星串联重复序列为6拷贝的变异植株中2个单株花期未抽苔开花,1株抽苔晚未形成正常种子;细胞质TR2位点VNTRs片段拷贝数为3的植株中2个单株未能正常抽薹,其他植株均正常抽薹结籽。