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人肌和兔肌肌酸激酶在低pH条件下再折叠的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
利用蛋白质内源荧光和远紫外CD光谱研究了在低pH条件下人肌肌酸激酶和兔肌肌酸激酶的构象状态。结果表明,在低离子强度下,随着酸的加入人肌和兔肌肌酸激酶去折叠,至pH2.0附近几乎都达到充分去折叠。它们的色氨酸荧光发射峰位红移至350nm,这表明了内埋的色氨酸残基已经完全暴露到极性溶剂之中,它们的远紫外CD光谱表明二级结构也遭破坏,但是仍保留有相当部分的二级结构。而且在高离子强度低pH条件下由Goto等人首先发现的中间体构象状态(融球结构状态)在我们的实验中也被观察到了。它具有与天然酶类似的二级结构。色氨酸荧光发射光谱表明与天然酶类似,它的最大发射峰位也为335nm表明了蛋白质已经完全折叠,然而其荧光强度远低于天然酶,表明这种结构状态具有较大运动性而导致荧光的动态淬灭。上述结果支持了Goto等人的发现,说明了融球中间体结构可能是蛋白质折叠过程需经历的一个中间态。 相似文献
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人肌肌酸激酶在SDS溶液中失活与构象变化的比较研究 总被引:3,自引:0,他引:3
应用紫外差吸收光谱、荧光发射光谱、CD先谱等监测手段,研究了SDS溶液滴定人肌肌酸激酶时的构象与活力变化的关系。结果表明酶的活力丧失先于以紫外差吸收先谱、荧先发射谱和巯基暴露数目所监测到的构象变化。SDS滴定时引起的酶的荧光发射光谱的变化在低滴定度阶段随着SDS滴定量的增加,荧光强度下降,发射峰位红移,当SDS浓度达到2.1mmol/L时,荧光强度增大,继续增加SDS滴定量,荧光强度又降低,发射峰位红移直至终态。紫外差吸收光谱随着SDS溶液的加入,281nm.287nm和292nm的负差吸收峰增大。CD光谱结果表明在本实验所用的SDS浓度范围内,SDS对人肌肌酸激酶的二级结构几乎没有影响。上述结果支持了酶的活性部位构象柔性的观点。 相似文献
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