川芎嗪抗组织粘连研究进展

对近年来川芎嗪抗组织粘连的作用,为临床研究和研发新药提供参考。结果发现,川芎嗪可通过抑制胶原增生过度、与粘连相关的因子过度表达、降低血浆中白细胞和纤维蛋白的浓度等多靶点、多环节发挥抗粘连作用。但是研究多集中在体外实验及动物实验,亟需进一步从临床研究上证实其抗粘连作用,未来基础研究应集中在川芎嗪生物材料的研发。     

Caveolin-1 siRNA对与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞自噬体表达影响的研究

为了探索乳腺癌相关的人成纤维细胞中窖蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)与自噬体的相关性及其对乳腺癌细胞的作用,该研究采用si RNA技术干扰成纤维细胞株ESF表达Cav-1,q RTPCR和Western blot确定si RNA干扰Cav-1表达的效果;Transwell insert方法共培养乳腺癌细胞株BT474和ESF细胞,单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverin,MDC)染色、激光共聚焦显微镜观察Cav-1 si RNA对自噬体表达的影响;q RT-PCR和Western blot检测Cav-1 si RNA对微管相关蛋白1轻链3II(microtubule-associated protein 1 light chain 3 II,LC3II)表达的影响;CCK-8方法检测BT474细胞的增殖和活力。结果显示,靶向Cav-1的si RNA下调了ESF细胞中Cav-1的表达;Cav-1 si RNA促进ESF细胞自噬体和LC3II的表达,转染了Cav-1 si RNA的ESF细胞与BT474细胞共培养对自噬体和LC3II的作用更为显著;BT474细胞在ESFsi Cav-1(ESF cells transfected with Cav-1 si RNA)细胞共培养条件下增殖显著加快。研究表明,Cav-1 si RNA促进了与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞自噬体和LC3II的表达,同时加快了与成纤维细胞共培养的乳腺癌细胞的增殖。     

大肠埃希菌嘌呤核苷磷酸化酶基因载体的构建及对胰腺癌细胞的作用

目的构建大肠埃希菌（Escherichia coli）嘌呤核苷磷酸化酶（purine nucleoside phosphorylase,PNP）基因表达载体,研究其生物活性,为肿瘤的基因治疗奠定基础。方法PCR扩增大肠埃希菌K12的PNP基因,T4连接酶将PNP连接人pMSCV逆转录病毒载体,构建重组逆转录病毒载体pMSCV／PNP。pM—SCV／PNP转化感受态大肠埃希菌XLI-Blue,提取pMSCV／PNP,酶切、PCR和测序鉴定。病毒包装细胞293产生重组逆转录病毒pMSCV／PNP,流式细胞仪测病毒滴度。pMSCV／PNP转染胰腺癌细胞BXPC-3,倒置荧光显微镜观察,FACS分离转染阳性细胞（GFP阳性）。RT—PCR检测PNPmRNA在胰腺癌细胞BXPC-3细胞中的表达,MTT法检测PNP基因的生物活性。结果PCR扩增出大肠埃希菌PNP基因（738bp）,酶切和PCR的电泳条带显示pMSCV／PNP,测序结果正常。293包装细胞产生高滴度（3．6×10^7U／m1）重组逆转录病毒pMSCV／PNP。RT—PCR实验结果表明,pMSCV／PNP转染的胰腺癌细胞BXPC-3表达PNPmRNA。前药6-甲基嘌呤-2’-脱氧核苷（MePdR）作用72h浓度达1．00mg／L,BXPC-3／PNP细胞存活率为10．09％,随着MePdR浓度加大,BXPC-3／PNP细胞存活率继续下降直至为0。结论构建了pMSCV／PNP载体,获得了表达大肠埃希菌PNP基因的BXPC-3细胞克隆,PNP／MePdR自杀基因系统对胰腺癌细胞BXPC-3有较强的抑杀作用。     

重组人血小板生成素对巨核细胞系-Dami细胞增殖的影响

为了探讨重组人血小板生成素（ｒｅｃｏｍ ｂｉｎａｎｔｈｕｍ ａｎ ｔｈｒｏｍ ｂｏｐｏｉｅｔｉｎ,简称ｒｈＴＰＯ）的生物学活性,采用了血浆凝块培养法,５－溴－２′－脱氧尿核苷（５－ＢｒｄＵ）掺入Ｄａｍ ｉ细胞ＤＮＡ－酶联免疫吸附法,研究了ｒｈＴＰＯ对巨核细胞系－Ｄａｍ ｉ细胞增殖的作用。结果发现, 在加有ｒｈＴＰＯ的培养基中, Ｄａｍ ｉ细胞迅速增殖, 集落数量和吸光度值高于对照组。实验组ｒｈＴＰＯ浓度为２５, ５０, １００, ２００ｎｇ／ｍ ｌ, Ｄａｍ ｉ细胞集落增殖率分别为２１．０５％ ,５７．８９％ ,１０５．２６％ ,１２１．０５％ ,吸光度增加率分别为１９．３５％ ,６１．２９％ ,１０３．２３％ ,１１９．３５％ ,ｒｈＴＰＯ促进Ｄａｍ ｉ细胞增殖的作用在一定范围内存在浓度依赖性。研究结果表明, ｒｈＴＰＯ对Ｄａｍ ｉ细胞具有促进增殖的作用。     

不动杆菌的耐药机制及监控策略

不动杆菌广泛分布于自然界,在严重的免疫低下病人中可引起机会性感染.由于选择压力,抗生素多重耐药性已成为临床感染的一个特点.不动杆菌的获得性耐药机制包括微孔蛋白通道、细菌细胞膜通透性、外排泵系统和其他酶系统的改变.进行国内和国际监控是对监测耐药的程度和播散情况有意义的方法.针对大量出现抗生素耐药菌,改变对抗生素的选择并进行抗生素循环使用有利于减少耐药性.     

细菌超广谱β-内酰胺酶的研究进展

由于抗生素的选择压力,目前产超广谱β-内酰胺酶细菌在临床标本中的分离率逐渐增加,由其引起的医院内感染也经常暴发.本文综述了其的类型、作用、实验室确证和检查方法、产超广谱β-内酰胺酶菌的耐药机制和临床防治方法,进一步强调了准确检测ESBL和正确选择抗生素在降低耐药性传递中的重要作用.     

生物柴油的制造技术与应用

目前,由可再生油脂原料制造绿色燃料生物柴油的技术成为各国的研究热点,本文重点介绍了生物柴油的酯交换法制备技术,并对生物柴油及其副产品甘油等在国内外的开发应用作了介绍。     

绿色荧光蛋白标记的D-氨基酸氧化酶基因在人宫颈癌细胞中的表达研究

为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因在人宫颈癌细胞 (HeLa细胞 )中的表达及其功能 ,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框 (ORF)的真核表达载体 pIRES DAAO。脂质体法转染HeLa细胞 ,荧光显微镜下观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达 ,流式细胞术分析转染效率并筛选荧光阳性细胞 ,命名为HeLa D。以不同浓度的前药D Ala处理HeLa D细胞 ,MTT法检测细胞存活率。结果显示 ,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在HeLa D细胞中表达 ,流式细胞术成功筛选出HeLa D细胞。前药D Ala能明显杀伤HeLa D细胞。结果表明 ,EGFP可作为报告基因快速筛选DAAO表达载体转染的细胞 ,DAAO/D Ala自杀基因系统可进一步用于肿瘤的基因治疗研究