不同离子辐照对离体质粒DNA损伤与转化活性的影响

利用 30Kev的N+ 、Ar+ 离子辐照离体质粒DNA ,分析了不同离子对DNA单双链断裂及转化活性的影响。结果表明 :N+ 、Ar+ 离子辐照均可引起质粒DNA单双链断裂和转化活性的变化 ,且随着辐照剂量的增加 ,单双链断裂频率增加 ,转化活性下降。Ar+对离体质粒DNA比N+ 具有更强的单双链断裂效应 ,且从 9× 10 15Ar+ cm2 剂量开始 ,质粒可完全丧失转化活性。质粒转化活性的大小与DNA单双链断裂频率呈正相关     

脉冲电泳技术介导玉米转基因研究

本研究采用脉冲电泳技术进行外源基因转化玉米种胚并直接成苗,分析了不同参数对种子出苗率的影响,通过除草剂抗性初步筛选,再进行：PCR检测,结果表明不同电泳时间对种子出苗率影响显著,外源DNA浓度对种子出苗率影响不显著,确定了除草剂对玉米幼苗(3～4叶期)适宜筛选浓度为50μg／ml,To代植株除草剂处理存活率与外源基因导入率呈显著相关(r=0．9623),且与外源DNA浓度呈二次曲线关系,近似于正态分布,外源质粒DNA浓度为300μg／ml时,外源基因导入率达最大值,为11．36％。     

水稻顶节间长度控制基因(EUI)的精细定位

通过对一水稻顶节间特异伸长突变体Mh-1进行经典遗传学和基因定位分析,认为该表型是一个核基因隐性突变所致。利用Mh-1与正常的T65-sd1杂交的F2群体对该位点定位研究分析,发现其与水稻第5条染色体长臂STS标记E30531和CAPS标记C903连锁,遗传距离分别为6．7cM和2．8cM。经进一步发展新的分子标记,将该基因精确定位在0．3cM的区域,为进一步克隆和研究该基因的分子机制奠定基础。     

离子辐照玉米花粉诱发DNA损伤的RAPD分析

利用 30Ｋｅｖ和 8种剂量的Ｎ+ 辐照玉米不同品种的花粉 ,通过ＲＡＰＤ(ＲａｎｄｏｍＡｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍＤＮＡ)技术利用 10 4个 10碱基随机引物分析了花粉基因组ＤＮＡ的损伤效应 ,结果表明 :经Ｎ+ 辐照的花粉ＤＮＡ在 10 4个引物的扩增下 ,共产生了 4 70条带 ,表明了明显的多态性变化。在供试剂量下共发现 51条多态性带 ,其中 3× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 、6× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 、9× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 、12× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 、15× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 和 18× 10 15Ｎ+ ｃｍ2 ＤＮＡ多态性的频率分别为 4 .3%、8.5%、1…     

玉米花粉粒直接PCR技术研究

利用成熟花粉粒制成悬液作为玉米基因组DNA模板直接进行PCR扩散,研究了不同花粉悬液浓度、花粉上清液对RAPD-PCR的影响,结果表明：花粉悬液浓度在4μg/50μl以上,用10碱基随机引物均能扩增出较清晰的PCR条带,且与叶片按改良Guidet法提取的DNA模板扩增的RAPD带型无明显差异,利用花粉悬液能有效地进行基因组DNA变异的RAPD分析和基因SCAR标记的检测。玉米单株花粉量可用于数百次以上的PCR反应,较叶片等植物组织用常规法提取DNA快速、简便、廉价,可有效地应用于以PCR为基础的植物基因组DNA变异,农艺性状的RAPD标记和分子标记辅助育种的研究。     

激光辐照对离体质粒DNA的断裂效应

利用低功率的Ｈｅ－ Ｎｅ 激光辐照离体质粒ＤＮＡ,并用离子束和紫外线为对照,分析了质粒ＤＮＡ的单双链断裂效应。结果表明：Ｈｅ－ Ｎｅ 激光辐照可诱发质粒ＤＮＡ 断裂,且断裂频率随辐照剂量增大而提高;Ｈｅ－ Ｎｅ 激光辐照后的质粒超螺旋双链ＤＮＡ存活率剂量曲线不同于紫外线和氮离子束。Ｈｅ－ Ｎｅ 激光诱发双链断裂的频率低于氮离子束和紫外线。     

浙江辐照对离体质粒DNA的断裂效应

利用低功率的Ｈｅ－Ｎｅ激光辐照离体质粒ＤＮＡ,并用离子束和紫外线为对照,分析了质粒ＤＮＡ的单双链断裂效应。结果表明：Ｈｅ－Ｎｅ激光辐照可诱发质粒ＤＮＡ断裂,且断裂频率辐照剂量增大而提高;Ｈｅ－Ｎｅ激光辐照后的质粒超螺旋双链的ＤＮＡ存活率剂量曲线不同于紫外线和氮离子束。Ｈｅ－Ｎｅ激光诱发双链断裂的频率低于氮离子束和紫外线。     

利用脉冲电泳技术转化玉米获得转基因植株的研究

本研究采用脉冲电泳技术将外源Bar基因和B-t基因转化玉米种胚并直接成苗,通过除草剂抗性初步筛选,再进行PCR检测、Southem杂交验证,探讨了脉冲电泳介导外源基因直接转化玉米种胚的有效性,结果表明：脉冲电泳技术介导玉米转基因是有效可行的,其T0代植株PCR阳性率与T1代植株转化率分别为11．36％和1．04％。在外源基因的转化中,处于不同启动子下的B-t基因和Bar基因共转化频率为90．9％。T1代PCR表现为阳性的植株Southem杂交结果显示脉冲电泳法介导的外源基因在受体中多为单拷贝,且已遗传给后代,并获得稳定表达。