淋病奈瑟菌对hCD46基因转染COS-1细胞的黏附

为研究hCD46在菌毛介导的淋病奈瑟菌宿主特异性黏附过程中的作用。用连接PCR技术扩增出启动子与cDNA相连的hCD46小基因,并将其置换出pcDNA3.1载体中的CMV启动子,构建成重组真核表达载体pCD46。转染COS-1细胞后用间接免疫荧光法检测到hCD46 cDNA在其自身启动子的指导下可在COS-1细胞膜表面有效表达,Western blotting检测表明表达产物的分子正确,用流式细胞术分选表达hCD46的基因转染细胞COS-1-46。细菌黏附实验显示菌毛阳性淋病奈瑟菌临床分离株对COS-1-46细胞有较强的黏附性。提示hCD46是菌毛介导的淋病奈瑟菌特异性黏附于人黏膜细胞的一种重要受体,hCD46小基因可用于淋病奈瑟菌感染转基因小鼠模型的制备。     

人巨细胞病毒pp150抗原区的原核表达及初步应用

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人体可引起广泛的临床症状,尤其是孕妇和免疫缺陷病人感染HCMV可产生严重的危害[1].传统的减毒活疫苗使用后可能会造成宿主机会性感染或导致肿瘤,因而限制了它的应用.与亚单位疫苗相比,DNA疫苗具有易于构建和制备、稳定性高等特点.多种HCMV病毒蛋白可刺激机体产生相应的抗体,但应选用免疫原性强、特异性好的蛋白抗原基因制备HCMVDNA疫苗.国内外的研究证实[2-5],HCMV的pp150蛋白具有较强的免疫原性.我们用RT-PCR方法扩增了pp150 420～752氨基酸之间多肽片段的编码基因,克隆至原核表达载体,构建了表达pp150抗原决定簇区的工程菌.     

2—KLG产生菌混合发酵特性及最佳混生模式的研究

氧化葡萄糖酸杆菌合成的2－KLG对巨大芽孢杆菌的生长繁殖具有明显的抑制作用,可缩短其生长周期。发酵体系中巨大芽孢杆菌的存在是氧化葡萄糖酸杆菌的生长繁殖和合成2－KLG所必需的,发酵过程中巨大芽孢杆菌裂解所释放的活性物质可能是刺激氧化葡萄糖酸杆菌合成2－KLG的主要原因。二菌混合发酵需在适宜的混生模式下才可达到最佳效果。     

人CD46启动子真核表达载体的构建

为了构建人CD46（hCD46）启动子指导目的基因表达的真核表达载体,提取HeLa细胞基因组DNA,用PCR扩增出hCD46基因的启动子区域,序列分析结果表明其与GenBank中hCD46基因5’端某片段的同源性为99.9％。用此启动子替换pcDNA3EGFP中的CMV启动子,并在hCD46启动子和EGFP基因之间插入兔β-球蛋白基因第二内含子（RGI）,得到的重组表达载体转染CHO和SP2/0两种鼠源细胞,流式细胞术检测表明CHO细胞EGFP的表达量高于SP2/0细胞,表达特性与人体CD46相似;RGI可以增强EGFP的表达量,但不改变其表达的组织特异性,提示克隆的hCD46启动子可以用于研制模拟人体CD46基因表达特性的转基因小鼠。     

紫外线辐射对蓝藻细胞活性的影响

紫外线辐射 2种蓝藻Anabaena 6 3l和Anabaenaazollae不同时间 ,用UV30 0 0分光光度计测定活体连续吸收光谱 ,并测定细胞存活率。结果发现紫外线辐射对这 2种蓝藻的光合色素有不同程度的破坏作用 ;紫外线辐射 2min左右就可以杀死全部的A .6 3l和A .azollae细胞。实验还证实了小剂量刺激效应的存在。     

添加剂在2—酮基—L—古龙酸发酵中的应用

研究了几种添加剂对2-酮基-L-古龙酸发酵的影响。发现两种可提高2-酮基-L-古龙酸的转化,确定了添加的最佳时间及浓度。     

cAMP-PKA通路参与Ⅱ组代谢性谷氨酸受体对新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的调节

本研究旨在探讨cAMP-PKA通路在Ⅱ组代谢性谷氨酸受体对离体延髓脑片呼吸节律性放电的影响中的作用。制作新生大鼠离体延髓脑片标本,主要包含延髓面神经后核内侧区(medial region of the nucleus retrofacialis,mNRF),并完整保留舌下神经根,以改良Kreb’s液(modified Kreb’s solution,MKS)恒温灌流脑片,用吸附电极记录舌下神经根呼吸节律性放电活动(respiratory rhythmical discharge activity,RRDA)。待放电活动稳定后,第1组灌流Ⅱ组代谢性谷氨酸受体特异性拮抗剂(2S)-α-ethylglutamic acid(EGLU)10min,第2组先给予cAMP-PKA通路激动剂Forskolin灌流10min,而后MKS洗脱至正常,灌流cAMP-PKA通路抑制剂Rp-cyclic3’,5’-hydrogen phosphorothioate adenosine triethylammonium salt(Rp-cAMPS)10min,第3组首先给予Rp-cAMPS10min,洗脱后联合Rp-cAMPS+EGL...     

医学微生物学实验课教学浅谈

医学微生物学是一门实践性极强的课程。通过实验课的学习 ,学生一方面可检查验证并加深对理论知识的掌握。另一方面 ,实验课还可培养学生的动手能力及科研思维能力。每个实验都有其背景资料、实验原理、操作要点、结果观察及分析讨论等内容 ,使学生了解本学科研究的基本方法和手段。但是长期以来 ,受重理论、轻实践 ,重知识的传授 (或学习 )轻能力的培养的观念影响。包括医学微生物学在内的大多数实验课未能独立设课 ,处于从属于理论课的地位。这在很大程度上影响了人才培养目标。本文从教学过程的各个环节谈谈我们的一些浅见。1　实验前讲…     

流行性感冒防控基础研究状况及关键科学问题分析

<正>继2009年全球性H1N1流感大爆发之后,2013年春季发生在中国的H7N9禽流感病毒感染人的事件再次提醒人们流感可能给人类带来的危害与灾难,同时也为流感相关研究提出了重要的科学命题.探索流感病毒的病原学基础及变异规律、及时预测预警流感发生趋势、提高药物与疫苗的研发能力等重大科学问题,将对中国的流感防控水平的提升具有重要的现实意义.本文总结了近年来在国家自然科学基金资助下中国科学家在流感基础研究领域的主要进     

三种乳腺特异表达载体表达特性的比较

为了比较不同来源乳腺特异表达载体的表达特性 ,将人溶菌酶 (hLYZ)cDNA分别克隆入自行构建的p2 0 5C3载体和国外引进的pBJ41和pBC1载体。重组载体p2 0 5C3LYZ、pBJLYZ和pBCLYZ分别用 2 5kDaPEI包裹后 ,通过尾静脉途径注射哺乳期小鼠。注射后 72h采集乳样 ,经微球菌溶解实验证明 ,3组小鼠乳汁中hLYZ的表达量分别为 87、69、60mg L ;从每组小鼠的 1 2种组织提取总RNA ,经Dotblotting检测证明 ,三种重组载体除在乳腺中表达外 ,p2 0 5C3LYZ还在小鼠的脾和肠、pBJLYZ在脾、pBCLYZ在脾和肾中具有一定的异位表达 ;在有hLYZmRNA转录的上述脏器中用微球菌溶解试验均可检测到hLYZ活性。这些实验结果表明 ,自行构建的乳腺特异表达载体的表达特性与从国外引进的表达载体无明显差别。