RAPD反应体系优化的研究

筛选随机扩增多态性DNA(RAPD)反应体系的最佳优化方案,以期获得稳定可靠的实验结果。选取对结果影响较大的4种因素(Taq酶、dNTP、引物、Mg2+)进行单因素设计,寻找最佳反应浓度。优化后得到4种因素的最佳反应浓度分别为Taq酶2.5U、dNTP 200μmol/L、引物1μmol/L、Mg2+2.5mmol/L。在优化的反应条件下,RAPD的稳定性和重复性均好。     

口服卡介菌治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究

目的:观察口服卡介菌对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果。方法:制备EAE大鼠模型,随机分为BCG高、中、低剂量组和PBS对照组,每组各15只,对大鼠治疗后的临床症状及病理组织学进行评估,提取脾脏淋巴细胞,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群,3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖能力。结果:BCG组EAE大鼠与对照组相比,临床症状减轻,发病时间延迟,炎性细胞浸润数减少;急性期,口服BCG各组CD4+、CD8+T细胞的数量随剂量增加而增加,缓解期CD4+、CD8+T细胞数量减少;口服BCG可促进EAE大鼠T淋巴细胞增殖能力;高、中剂量组上述变化均较其它分组明显。结论:口服BCG可很好的诱导免疫耐受,延迟EAE发病,减轻炎症反应,改善临床症状。     

口服卡介菌诱导免疫耐受的CD4+CD25+调节性T 细胞机制研究

目的:研究口服卡介菌诱导免疫耐受对CD4+CD25+调节性T细胞的影响。方法:采用口服MPB制备EAE大鼠模型,随机分为BCG组(0.5mg/kg)和EAE模型组(PBS),每组各15只,连续经口灌服给药14d,同时选取15只健康大鼠作为对照组。分别于免疫后15d、27d流式细胞术检测外周血、胸腺及脾脏中CD4+CD25+T淋巴细胞百分率,ELISA检测血清IL-6、TGF-β、IgE、IgG含量。结果:与EAE模型组相比,免疫后BCG组大鼠外周血、胸腺及脾脏中CD4+CD25+T淋巴细胞百分率增加,血清IL-6、TGF-β含量上升,血清IgE、IgG抗体水平下降。结论:口服BCG通过上调淋巴器官中CD4+CD25+T淋巴细胞比例,抑制效应性T细胞活性,发挥免疫耐受作用。     

口服卡介菌诱导免疫耐受的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞机制研究

目的：研究口服卡介菌诱导免疫耐受对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响。方法：采用口服MPB制备EAE大鼠模型,随机分为BCG组（0.5mg/kg）和EAE模型组（PBS）,每组各15只,连续经口灌服给药14d,同时选取15只健康大鼠作为对照组。分别于免疫后15d、27d流式细胞术检测外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率,ELISA检测血清IL-6、TGF-β、IgE、IgG含量。结果：与EAE模型组相比,免疫后BCG组大鼠外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率增加,血清IL-6、TGF-β含量上升,血清IgE、IgG抗体水平下降。结论：口服BCG通过上调淋巴器官中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞比例,抑制效应性T细胞活性,发挥免疫耐受作用。     

革兰阴性杆菌产AmpC酶诱因分析及监测

目的:探讨革兰阴性杆茵AmpC酶的诱导与三代头孢用药时间长短的关系,调查高产AmpC酶菌株在我市医院及不同病室的分布,指导临床用药。方法:采用头孢西丁初筛、FOX三维确证试验检测革兰阴性杆菌产AmpC酶率;以稀释渐进突变法对耐药突变株进行筛选;并回顾性调查比较临床高产AmpC酶和非高产AmpC酶患者用药的时间。结果:革兰阴性杆菌AmpC酶总检出率为13.9%,其中绿脓假单胞菌为43.6%,摩根氏菌为25.0%,阴沟肠杆菌为20.9%,弗氏枸橼酸杆菌为14.2%,粘质沙雷菌为13.3%,奇异变形杆菌为7.7%,鲍曼不动杆菌为10.1%,产气肠杆菌为6.9%,肺炎克雷伯菌为5.5%,大肠艾希菌为1.9%;头孢他啶(CAZ)和头孢噻肟(CTX)对持续高产AmpC酶突变株的选择能力最强,头孢吡肟(FEP)选择性较弱,亚胺培南(IPM)无选择性;临床高产AmpC酶患者三代头孢平均用药时间为8.62±1.63d(3-18d),非高产AmpC酶患者平均用药时间4.91 1.53d(1-11d),p<0.05,两者差异有统计学意义。结论:不同抗生素诱导产生高产AmpC酶的突变株存在种属差异性,且诱导能力的变化存在时空变化。     

口服卡介菌治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的研究

目的：观察口服卡介菌对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）的治疗效果。方法：制备EAE大鼠模型,随机分为BCG高、中、低剂量组和PBS对照组,每组各15只,对大鼠治疗后的临床症状及病理组织学进行评估,提取脾脏淋巴细胞,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群,3H—TdR掺入法检测淋巴细胞增殖能力。结果：BCG组EAE大鼠与对照组相比,临床症状减轻,发病时间延迟,炎性细胞浸润数减少;急性期,口服BCG各组CD4^＋、CD8^＋T细胞的数量随剂量增加而增加,缓解期CD4^＋、CD8^＋T细胞数量减少;口服BCG可促进EAE大鼠T淋巴细胞增殖能力;高、中剂量组上述变化均较其它分组明显。结论：口服BCG可很好的诱导免疫耐受,延迟EAE发病,减轻炎症反应,改善临床症状。