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用Bacillussphaericus63菌为材料,经DNA-Sepharose和CibacronBlueF3GA-Sepharose两步亲和层析,将Bsp63Ⅰ纯化到均一程度。酶比活力达61400U/mg蛋白。用凝胶过滤法测得该酶分子量为113800。该酶样品在SDS-PAGE中呈现为一条蛋白带,并测得其亚基分子量为56800。用DNS-Cl法测得该酶N-末端氨基酸为丙氨酸。上述结果表明该酶分子是由两个相同亚基组成。 相似文献
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限制性核酸内切酶Bsp 631特性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
11型限制性核酸内切酶的发现和应用,革
命性地推动了分子生物学和遗传工程的发展。
不管从酶本身的理论研究或从工具酶的应用研
究方面来说,都必须首先确定酶促反应系统的
最适条件以及各种因素对酶活性的影响,但是
目前关于这类酶促反应条件的确定,多数是根
据定性实验和经验,很少是根据定量实验作动
力学描述。
限制性核酸内切酶Bsp 631是我国自己分
离的菌种和发现的新酶Ci]。已测定其识别序列,
并确定它是Pst I酶的异源同功酶。根据我们
对这两个异源同功酶的比较研究,我们认为
Bsp 631比PsA有较多的优点:酶含量较高,且
比较稳定,易于纯化。因此,估计可用Bsp 631
取代PstIo但对Bsp 631酶性质的研究,国内
外尚未见报道。因此我们采用本实验室自己纯
化的Bsp 631酶,用定量测活的方法,对其最适
反应条件,二价阳离子及一价阳离子对其活性
的影响,以及酶的Km值等进行了初步的研究,
从而为今后对该酶的动力学研究结构分析及其
作为工具酶的应用提供了必要的资料。 相似文献
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