小鼠脑组织及培养神经元Neuro-2a 在内质网应激反应时的基因表达谱分析

内质网是真核细胞的重要细胞器。某些细胞内外因素如病原体感染等能引起从内质网到胞浆和胞核的信号传导途径活化,即内质网应激反应。但是,目前国内外尚无针对内质网应激反应的基因表达谱分析报道。本研究中,用3种已报道的内质网应激反应诱导剂,包括蛋白质糖基化抑制剂衣霉素(tunicamycin)、内质网Ca ²⁺-ATPases抑制剂毒胡萝卜素（thapsigargin）和乙脑病毒(Japanese encephalitis virus, JEV),分别处理小鼠颅腔和小鼠脑神经瘤细胞（Neuro-2a）,试剂处理组与未处理组的第二代RNA测序分析发现,衣霉素、毒胡萝卜素和乙脑病毒在体外和体内均引起分子伴侣基因Hsp70表达上调,诱导内质网应激反应。衣霉素、毒胡萝卜素和乙脑病毒体外处理诱导的内质网应激反应信号通路中,基因差异表达相似性高于体内处理组。乙脑病毒和糖基化抑制剂衣霉素体内外处理,主要诱导内质网应激反应的非折叠蛋白质反应信号通路,引起相关基因Atf4、Bip、Edem和Perk等表达上调。内质网Ca ²⁺-ATPases抑制剂毒胡萝卜素主要诱导内质网超负荷反应,激活NF-κB信号通路。乙脑病毒诱导的内质网应激反应相关差异表达基因数量最多,体外与体内合计有40种。乙脑病毒体内外处理上调的基因包括Bax、Casp12、Atf4、Bip、Edem和Perk等,下调的基因包括Sec23/24、Nef、Svip和Jnk等。糖基化抑制剂衣霉素体内外处理上调基因包括Gadd34、Atf4、Ermani和Bip等,下调基因包括Grp94、Atf6、Sec23/24和Nef等。内质网Ca ^-2+-ATPases抑制剂毒胡萝卜素体内外处理上调的基因包括Sec61、Trap和Ask1等。衣霉素、毒胡萝卜素和乙脑病毒体内外处理也通过内质网应激反应,调控与炎症或凋亡相关的MAPK信号通路和P53信号通路。本研究首次通过使用3种内质网应激反应诱导剂分别处理小鼠和细胞,揭示了体内外内质网应激反应引起的基因表达谱变化,为内质网应激反应相关疾病的治疗提供了新思路。     

土壤中拮抗菌株铜绿假单胞菌HBD-12次级代谢产物的分离鉴定及其体外抗菌抗肿瘤活性检测

为从土壤中筛到具有抗菌和抗肿瘤等生物活性的菌株,以孕烯醇酮作为唯一碳源进行筛菌,经分子生物学鉴定及菌株发酵液抑菌活性测定,发现一株铜绿假单胞菌HBD-12对大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌、指状青霉、意大利青霉具有较好抑菌效果。运用柱层析法分离纯化该菌株发酵液成分,采用波谱法解析所得单体化合物结构,并使用HTRF激酶检测试剂盒测定其抗肿瘤活性。结果显示：分离得到的单体化合物1-羟基-9,10-二氮杂菲和3-羟基-9,10-二氢二氮杂菲均具有显著的抗肿瘤活性。在浓度为20 μg/mL时,1-羟基-9,10-二氮杂菲和3-羟基-9,10-二氢二氮杂菲对Aurora激酶A的抑制率分别为78.39%±2.29%和60.34%±8.35%。由此可见该菌株的次级代谢产物对新型抗菌、抗肿瘤药物的研发具有很好的利用价值。     

垃圾堆积点土壤中广谱拮抗菌株的分离鉴定及抑菌特性

[目的]从积年垃圾堆积点土壤中筛选具有高效抑菌能力的广谱拮抗菌株并研究其抑菌特性,寻找乡镇垃圾堆积点污染治理的新思路。[方法]采用平板稀释法和管碟法从乡镇积年垃圾堆积点的土壤中分离拮抗真菌,并通过形态观察、生理生化特性及分子生物学鉴定分析对拮抗菌株进行鉴定。通过测定抑菌活性物质的极性,选择合适的有机试剂对拮抗真菌的发酵菌体甲醇浸提物及发酵液进行萃取,并利用TLC-Bioautography法对发酵液及发酵菌体中的抑菌活性组分进行分析。使用23种指示菌测定拮抗真菌DAZ-2的发酵菌体乙酸乙酯粗提物的抑菌广谱,测定粗提物在高温、酸碱、紫外和自然光条件下抑菌能力,以及对大肠杆菌和白色念珠球菌的最小抑菌浓度。[结果]分离得到一株传代稳定的广谱拮抗真菌DAZ-2,经过形态观察、生理生化特性测定及ITS序列分析,菌株鉴定为Aspergillus fumigatus。通过极性测定,选择乙酸乙酯对烟曲霉DAZ-2发酵菌体甲醇浸提物及发酵液进行萃取,TLC-Bioautography法分析表明两者中的抑菌活性物质不是同一组分,且存在多组分物质共同作用产生抑菌效果的可能性;菌体浸提物乙酸乙酯萃取部分(200μg/mL)对11种指示菌具有抑菌效果,对大肠杆菌和白色念珠球菌的MIC为7.50μg/mL和15μg/mL,且对高温、酸碱、紫外、自然光照都具有较强的稳定性。[结论]分离得到一株高效抑菌且传代稳定的广谱拮抗菌株烟曲霉DAZ-2,有希望为微生物药物的开发和乡镇垃圾堆积点污染治理提供科学依据。     

粘质沙雷氏菌S823次生代谢产物及其抗肿瘤活性研究

为从土壤中筛选得到能转化甾体化合物和产生具有抑制肿瘤生长的活性化合物菌株,并分离鉴定出活性化合物。利用胆固醇作唯一碳源筛选,通过形态观察、生理生化测试,以及16S rRNA基因序列同源性分析来确定筛选菌株。以Neuro-2a细胞(小鼠神经瘤细胞)作为供试细胞,通过活性跟踪,用柱层析法分离活性成分,经波谱方法鉴定产生的活性物质等方法。结果表明从土壤中筛选得到一株菌株具有抑制肿瘤生长的活性;此菌株与粘质沙雷氏菌属(Gen Bank No.序列号为KR817904. 1)相似性为99%,命名为粘质沙雷氏菌S823;活性化合物为灵菌红素,其对细胞周期分裂蛋白25B (CDC25B)的抑制率是67. 7±2. 9%,对含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)抑制率为56. 7±0. 4%,对Neuro-2a细胞有抑制作用,其IC50是0. 05μM。灵菌红素是具有抗肿瘤活性的化合物。     

Two New Phenolic Glycosides from Viburnum cylindricum ( Caprifoliaceae)

从水红木( Viburnum cylindricum ) 植物中分离出2 个新化合物, 1- phloroglucinyl- ( 6-methybutyryl )-B-D- glucopyranoside命名为cylindrin A ( 1) , 1- [ 4- ( 3- hydroxy-l propyl ) ]- pyrocatechol- ( 6-methybutyryl )-B-D- glucopyranoside, 命名为cylindrin B ( 2) , 以及7 个已知化合物tachioside ( 3) , syingic acid-4-B-D- glucopyran oside ( 4) , 1-B-D-glucopyranosyloxy-3-methoxy-5- hydroxybenzene ( 5 ) , 4- hydroxy- 3-methoxypheno-l 1-O-B-D- glucoside ( 6 ) , 4-hydroxy- 2, 6- dimethoxypheno-
l 1-O-B-D- glucoside ( 7) , phlorogluc ino-l 1-O-B-D-glucoside ( 8 ) , 1-B-D- glucosyloxy-2- ( 3-methoxy- 4- hydroxyphenyl) propane- 1, 3- diol ( 9) . 它们的结构经波谱方法得到鉴定。3~ 9 为首次从该种植物中分离得到。     

沙针（Osyriswightiana）的化学成分研究

从沙针乙醇提取物的乙酸乙酯部分分离得到11个化合物,它们的结构经波谱分析鉴定为(+)儿茶素(1)、(+)-afzelechin-3-氧-L-鼠李糖(2)、afzelechin-(4α-8)-儿茶素(3)、(+)-儿茶素-3-氧-L-鼠李糖(4)、二氢山奈酚3-氧-L鼠李糖(5)、反式-植醇(6)、24-乙基胆甾烷-5,22.二烯-3β-醇-棕榈酸酯(7)、2.十八烯酸(8)、芒柄花萜醇(9)、3β-谷甾醇(10)、胡萝卜苷(11).化合物1～11为首次从该属植物中分离得到.     

水红木中两个新的酚苷成分

从水红木（Viburnum cylindricum）植物中分离出2个新化合物,1-phlomglucinyl-（6-methybutyryl）-β-D-glucopyranoside命名为cylindrin A（1）,1-[4-（3-hydroxyl-propyl）]-pyrocatechol-（6-methybutyryl）-β-D—glucopyranoside,命名为cylindrin B（2）。以及7个已知化合物tachioside（3）,syingic acid-4-β-D-glucopyran oside（4）,1-β-D—glucopyanosyloxy-3-methoxy-5-hydroxybenzene（5）,4-hydroxy-3-methoxyphenol-1-O-β-D-glucoside（6）,4-hydroxy-2,6-dimethoxyphen-1-O-β-D-glucoside（7）,phlorogluc inol-1-O-β-D-glucoside（8）,1-β-D-glucosyloxy-2-（3-nrethoxy-4-hydroxyphenyl）propane-1,3-diol（9）．它们的结构经波谱方法得到鉴定。3—9为首次从该种植物中分离得到。     

山敲骨的化学成分研究

从云南民间药用植物山敲骨(Pseuderanthemum latifolim(vahl)B.Hansen)的茎叶中分离得到8个化合物,经波谱分析鉴定为尿囊素(allantoin,1),7,4′-二羟基黄酮(7,4-′dihydroxyflavone,2),5,4′-二羟基-7甲氧基黄酮(5,4-′dihydroxy-7-methoxyflavone,3),5,6-二羟基-3′,4′,7,8-四甲氧基黄酮(5,6-dihydroxy-3′,4′,7,8-tetramethoxyflavone,4),sitoindosideΙ(5),antirrinoside(6),stigmasterol(7),stigmasterol-3β-O-glucopyranoside(8)。     

胆固醇转化菌株的筛选及发酵条件优化

【目的】从土壤中筛选及鉴定具有转化胆固醇能力的菌株SE-1,对转化产物进行结构鉴定,并通过一定的工艺条件优化提高转化产率。【方法】利用胆固醇为唯一碳源筛选能转化胆固醇的菌株SE-1,对菌株进行形态、生理生化特征试验及16S rRNA基因序列同源性分析确定该菌株的系统发育学地位。发酵转化产物经氯仿萃取,对转化产物进行硅胶板薄层层析法分析,用硅胶柱层析法、Sephadex LH20分离产物,通过1H-NMR、13C-NMR分析确定转化产物的化学结构。对菌株转化胆固醇的发酵培养基的碳源、氮源、底物添加方式及发酵条件进行优化。【结果】菌株SE-1为革兰氏阴性菌,生理生化特征与洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)相似,16S rRNA序列与洋葱伯克霍尔德氏菌(GenBank No.U96927)相似性为99%。硅胶薄层层析显示转化产物为两种产物。发酵转化时,在胆固醇-吐温乳化液的添加量为1 g/L,碳源糖蜜5%,氮源(NH4)2SO40.3%,接种量4%,发酵液pH7.5,36℃发酵的条件下,7β-羟基胆固醇的产率最高,达到34.4%。【结论】分离得到的菌株SE-1鉴定为Burkholderia cepacia。菌株SE-1转化胆固醇的主产物为7β-羟基胆固醇,次产物为7-酮基胆固醇,胆固醇7β-羟基化转化率在最适的转化条件下比优化前提高了20.8%。     

荚迷属植物化学成分及生物活性研究进展

不少荚迷属植物有悠久的药用历史,从该属植物中分离到的化学成分有二萜、三萜、环烯醚萜苷、黄酮类、木脂素及酚苷.二萜类化合物主要是vibsane型化合物,某些具有生物活性;三萜类化合物主要是齐墩果烷型和重排达玛烷型;环烯迷醚萜苷类其糖苷的连接位置主要在环烯迷醚的C11位上,C1位连有异戊烯基.生物活性研究发现一些提取物具有抗氧化作用,对A549、HT-29和PC-3和NUGC癌细胞有毒性.本文对国内外有.关荚迷属植物化学成分和生物活性的研究作一综述,为开发利用荚迷属植物资源提供科学依据.