ErbB-4受体介导卵巢癌细胞增殖、侵袭等生物学行为的实验研究

探讨ErbB- 4受体在卵巢癌细胞增殖、侵袭等生物学行为中的作用.免疫组化检测ErbB- 4受体在卵巢癌细胞株OVCAR-3表达;噻唑蓝比色法(MTT)测定不同浓度的ErbB- 4单克隆抗体(Ab-3)对体外培养的卵巢癌OVCAR-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;侵袭实验观察Ab-3对OVCAR-3侵袭能力的影响.结果表明,ErbB- 4在OVCAR-3细胞株中呈阳性表达;不同浓度(0.625～10 μg/ml)的Ab-3均能抑制OVCAR-3细胞生长,且具有浓度和时间依赖性,其作用72 h的中效浓度为4.48 μg/ml.流式细胞仪检测发现Ab-3(2.0 μg/ml)作用24、48及72 h后,OVCAR-3细胞出现S期阻滞,肿瘤细胞的凋亡率逐渐增加;抗体处理组穿透侵袭小室滤膜的细胞数(78.0±6.1)明显少于对照组(132.0±17.2)(P<0.01).因此,Ab-3可抑制内源性ErbB- 4表达的OVCAR-3细胞株的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡.     

逆转录病毒介导的siRNA对宫颈癌细胞CXCR4表达的抑制

目的：观察逆转录病毒介导RNA干扰抑制宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的效率。方法：人工合成CXCR4特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,装入带有绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒载体pSOS,先转染PT67细胞包装成病毒,收获病毒上清,再将其转染Caski细胞,采用实时定量PCR和Western blotting观察CXCR4表达受抑的情况。结果：成功构建pSOS-CXCR4载体,并发现在24、48和72h,CXCR4 mRNA的抑制率分别为29.9%,56.8%和62.8%,CXCR4蛋白的抑制率分别为43.6%,49.6%和62.9%。结论：逆转录病毒介导RNA干扰能有效抑制宫颈癌细胞CXCR4表达。     

Maspin在卵巢癌中作用机制的体外研究

目的:检测卵巢癌细胞中Maspin对细胞增殖能力、VEGF和乙酰肝素酶Heparanase(HPA)表达的影响。方法:构建Maspin真核表达质粒,体外转染卵巢癌SKOV3细胞,磺基罗丹明B法((sulforhodamine B,SRB)检测转染后细胞增殖能力变化,细胞免疫化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测VEGF和HPA的表达。结果:成功构建Maspin真核表达质粒并转染于卵巢癌细胞SKOV3后,证实转染目的基因的SKOV3-Maspin细胞中Maspin表达明显增强;转染Maspin cDNA的SKOV3细胞的体外增殖能力明显弱于转染空载体组和未转染组,而后两者之间差异无显著性;转染Maspin cDNA的SKOV3细胞中VEGF的表达明显弱于转染空载体组和未转染组,而后两者之间差异无显著性;但是HPA的表达无明显改变。结论:Maspin可能通过下调VEGF的表达抑制卵巢癌血管生成。HPA表达与卵巢癌的恶性生物学行为密切相关,但与Maspin无明显相关性。     

子宫肌瘤组织中HMGI-C基因的表达与肌瘤大小之间关系

目的 探讨了HMGI-C基因的表达与子宫肌瘤瘤体大小之间的关系.方法 120例子宫肌瘤标本及临近的正常子宫肌层标本来源于81名子宫肌瘤患者经子宫全切除术和子宫次全切除术的标本.通过RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测子宫肌瘤和正常子宫肌层的HMGI-C基因蛋白的表达含量,并将其分为Ⅰ组:HMGI-C表达阳性的子宫肌瘤组,Ⅱ组:HMGI-C表达阴性的子宫肌瘤组,Ⅲ组:正常子宫肌层组.结果 所有子宫肌瘤标本的直径范围在1.0～17.6cm.平均直径为7.5±0.24cm.有HMGI-C基因表达的子宫肌瘤标本的平均直径(12.1±2.9cm)明显大于无HMGI-C基因表达的子宫肌瘤标本的平均直径(6.9±3.0cm)(P=0.003).根据全部标本的平均直径将子宫肌瘤标本分为直径＞7.5cm的子宫肌瘤标本组和直径≤7.5cm的子宫肌瘤标本组,前者的HMGI-C基因的阳性表达比率也明显高于后者(P＜0.001).结论 本实验提示HMGI-C基因在子宫肌瘤组织中的表达与肌瘤瘤体大小有明显的相关性,HMGI-C基因可能促进子宫肌瘤细胞的生长.