TGF-β1诱导的Postn、α-SMA和CollagenⅠ在宫腔粘连内膜组织中高表达与粘连严重程度相关

骨膜蛋白（periostin, Postn）与转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1,TGF-β1）信号通路活动密切相关,并参与多种纤维化疾病的病理形成,但在宫腔粘连（intrauterine adhesions,IUAs）形成过程中的作用机制尚不清楚。为了解Postn与纤维标志物（α-平滑肌肌动蛋白：alpha smooth muscle actin,α-SMA,Ⅰ型胶原：CollagenⅠ）在宫腔粘连发病中的作用,本研究收集宫腔粘连（实验组）轻、中、重度各20名患者的内膜组织,非宫腔粘连者20名（对照组）,利用实时荧光定量PCR技术、Western印迹技术和免疫组化染色证明：Postn与α-SMA、CollagenⅠ在mRNA和蛋白质表达水平的趋势一致,且与宫腔粘连严重程度呈正相关;实验组Postn、α-SMA 和 CollagenⅠ较对照组明显升高,其中以中、重度宫腔粘连患者内膜组织Postn、α-SMA和CollagenⅠ表达有非常显著的统计学差异（P＜0.01）。同时,为探究TGF-β1与Postn等纤维标志物的关系,利用重组人转化生长因子TGF-β1刺激原代子宫内膜基质细胞后,Western印迹结果显示,TGF-β1与Postn、α-SMA和CollagenⅠ蛋白质表达变化呈现剂量和时间依赖关系。上述结果证实,内膜纤维化是宫腔粘连的主要特征,由Postn等纤维产物参与形成,且与粘连程度相关。推测该病理过程可能与内膜损伤后,TGF-β1促使子宫内膜基质细胞成纤维分化、诱导Postn持续高表达有关。     

shRNA抑制人卵巢癌SW626细胞CXCR4基因的研究

探讨应用RNA干扰技术沉默趋化因子受体4(CXCR4)基因的表达,研究其对人卵巢癌SW626细胞增殖的抑制作用。设计合成两对特异性针对CXCR4基因的Oligo siRNA,用脂质体转染法转染至SW626细胞中,荧光共聚焦显微镜检测转染效率,采用Western blotting检测CXCR4蛋白表达情况,同时利用M'IT试验检测转染后细胞增殖抑制情况。结果显示,转染Oligo siRNA后,SW626细胞CXCR4蛋白表达水平降低(P0.05);细胞增殖的抑制率明显增高(P0.05)。体外合成的特异性针对CXCR4基因的Oligo siRNA对卵巢癌细胞株SW626中CXCR4基因表达和细胞增殖均有明显抑制作用。     

原因不明子宫内膜薄雌激素受体α基因多态性及其表达

旨在探讨原因不明子宫内膜薄雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)基因多态性及其与表达的关系。选择120名原因不明子宫内膜薄患者为试验组,120名子宫内膜正常人群作为对照组。应用分子生物学的方法分析ERα基因PvuⅡ,XbaⅠ限制性片段长度多态性。通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法分析ERα表达。结果显示,P基因型频率试验组为47.1%,对照组为30.0%,OR值:2.076。试验组X基因型频率为20.8%,对照组为30.4%,OR值:0.602。Pvu II和Xba I限制性片段长度多态性在两组中均呈多态性分布。试验组ERα的mRNA和蛋白质表达均比对照组降低(P0.05)。由此得出,ERα基因多态性与原因不明子宫内膜薄有关,P等位基因可能是其危险因素,X等位基因可能是其保护因素。ERα在子宫内膜中原因不明子宫内膜薄中的表达低于子宫内膜厚度正常子宫内膜。     

Maspin在卵巢癌中作用机制的体外研究

目的:检测卵巢癌细胞中Maspin对细胞增殖能力、VEGF和乙酰肝素酶Heparanase(HPA)表达的影响。方法:构建Maspin真核表达质粒,体外转染卵巢癌SKOV3细胞,磺基罗丹明B法((sulforhodamine B,SRB)检测转染后细胞增殖能力变化,细胞免疫化学及半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测VEGF和HPA的表达。结果:成功构建Maspin真核表达质粒并转染于卵巢癌细胞SKOV3后,证实转染目的基因的SKOV3-Maspin细胞中Maspin表达明显增强;转染Maspin cDNA的SKOV3细胞的体外增殖能力明显弱于转染空载体组和未转染组,而后两者之间差异无显著性;转染Maspin cDNA的SKOV3细胞中VEGF的表达明显弱于转染空载体组和未转染组,而后两者之间差异无显著性;但是HPA的表达无明显改变。结论:Maspin可能通过下调VEGF的表达抑制卵巢癌血管生成。HPA表达与卵巢癌的恶性生物学行为密切相关,但与Maspin无明显相关性。     

原因不明月经过少子宫内膜雌激素受体β表达

探讨原因不明月经过少子宫内膜雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）表达。从两组人群中分别选取原因不明月经过少子宫内膜组织40例,月经量正常子宫内膜组织40例。通过逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western印迹法检测ERβ表达。分析实验组与对照组ERβ-mRNA及蛋白质的表达情况,将不同年龄、人流次数子宫内膜ERβ-mRNA及蛋白质的表达进行比较。实验组ERβ-mRNA表达量为0.6457±0.2957,对照组为0.9637±0.3621,实验组ERβ-mRNA比对照组表达下调,差异有统计学意义（t=-6.589,P〈0.001）。实验组ERβ蛋白质表达量为347.37±30.35,对照组为445.21±45.67,实验组ERβ蛋白质比对照组表达下调,差异有统计学意义（t=-4.353,P〈0.001）。两组人群不同年龄、人流次数ERβ表达比较,差别无统计学意义。原因不明月经过少患者ERβmRNA及蛋白质在子宫内膜中的表达低于月经量正常子宫内膜,其可能与月经量减少有关。原因不明月经过少患者子宫内膜ERβ的表达与年龄、人流次数无关。     

原因不明月经过少子宫内膜雌激素受体β基因多态性及其表达

目的:探讨原因不明月经过少子宫内膜雌激素受体β(ERβ)基因多态性及其与表达的关系。方法:从2组人群中分别选取原因不明月经过少子宫内膜组织40例、月经量正常子宫内膜组织40例,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测ERβ的表达;分析实验组与对照组ERβmRNA及蛋白质的表达情况,将ERβ基因的各基因型、等位基因型与子宫内膜ERβmRNA及蛋白质的表达之间分别进行比较。结果:实验组ERβmRNA表达量为0.6457±0.2957,对照组为0.9637±0.3621,实验组比对照组表达下调,差异有统计学意义(t=-6.589,P0.001);实验组ERβ蛋白质表达量为347.37±30.35,对照组为445.21±45.67,实验组比对照组表达下调,差异有统计学意义(t=-4.353,P0.001);2组RsaⅠ基因型、AluⅠ基因型、CA重复序列基因型ERβ表达差异均无统计学意义。结论:原因不明月经过少患者ERβmRNA及蛋白质在子宫内膜中的表达低于月经量正常子宫内膜,可能与月经量减少有关;2组人群ERβ基因RsaⅠ、AluⅠ、CA重复序列基因型及等位基因型子宫内膜表达无差异。     

原因不明子宫内膜薄雌激素受体β基因RsaⅠ、AluⅠ多态性

旨在探讨重庆地区雌激素受体β基因RsaⅠ、AluⅠ多态性与原因不明子宫内膜薄的关系.选择重庆地区120名原因不明子宫内膜薄患者为试验组,120名正常子宫内膜作为对照组.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性的方法分析ERβ基因RsaⅠ、AluⅠ多态性.观察ER β基因多态性在试验组与对照组中的分布,分析各基因型、等位基因型及单倍体型特征.结果显示,两组ER β基因RsaⅠ基因型比较差异有显著性,R等位基因型频率试验组为37.1%,对照组为48.3%,OR值为0.630(95%CI=0.438～0.907),P=0.013;两组ER β基因AluⅠ基因型比较差异没有显著性.试验组和对照组ER β基因RsaI和AluI单倍体型D′分别=0.1138、0.0680,其连锁不平衡性不强.ER β基因多态性与原因不明子宫内膜薄有关,R等位基因可能是其保护因素.     

腹腔镜子宫次全切除术对患者机体应激的影响

为了评估腹腔镜次全子宫切除（LSH）和开腹次全子宫切除（TASH）对机体应激影响,选用以随机方式分为开腹次全子宫切除组（A组）、腹腔镜次全子宫切除组（B组）。取术前24h、术后24h和术后72h患者外周静脉血,分别检测血清中皮质醇（Cor）、甲状腺相关激素（FT3、FT4、TSH）水平的变化。开腹组内皮质醇水平于术后24h则高于术前（P=0．016）,而腹腔镜组升高不显著（P=0．057）,两者比较差异有统计学意义（P=0．038）。术后24h,两组病人FT3浓度下降,此时点两组间差异无统计学意义（P=0．256）。术后72h,两组间差异有统计学意义（P=0．042）。术后24h开腹手术组FT4浓度低于同时点腹腔镜手术组FT4浓度（P=0．040）。术后72h两组均能恢复至术前水平（pA=0．412,pB=0．578）,两组间差异无统计学意义（P=0．723）。TSH的比较：开腹组与腹腔镜组比较术后24h均下降,术后72h又有所上升,但各时点变化均不显著（P〉0．05）,且两组间差异也无统计学意义（P〉0．05）。腹腔镜次全子宫切除比开腹次全子宫切除对机体的应激影响小。     

Jagged1/notch1在宫腔粘连患者子宫内膜中表达上调

Notch通路是与细胞增殖、分化、凋亡等密切相关的通路,其相关蛋白表达异常参与多种疾病的发生,但其在宫腔粘连中的作用尚不清楚.为探讨jagged1/notch1在宫腔粘连（IUAs）发病中的作用,本实验选择经宫腔镜诊断为宫腔粘连患者40例为IUAs组,非宫腔粘连患者25例为对照组,宫腔镜直视下取子宫内膜组织,采用实时荧光定量PCR法检测jagged1、notch1 mRNA表达,发现IUAs组jagged1、notch1的表达显著高于对照组.免疫荧光染色、免疫组织化学和Western印迹技术检测jagged1、notch1蛋白表达. 结果显示,与对照组相比,IUAs组jagged1、notch1蛋白表达水平均明显升高.以上结果表明, Notch通路相关因子jagged1、notch1的高表达可能与宫腔粘连的发生发展有关.     

RVVC患者阴道分泌物中SP-A的表达及意义

旨在探讨肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)在复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)患者阴道分泌物中的表达及意义。收集RVVC患者、外阴阴道假丝酵母菌患者(VVC)及健康体检者(对照组)阴道分泌物各20例,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组中SP-A蛋白的含量,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测各组中SP-A的基因表达情况。用ELISA方法检测各组中SP-A蛋白的含量发现,VVC组的SP-A明显高于对照组(P0.05),RVVC组的SP-A高于对照组及VVC组(P0.05)。RT-PCR检测结果发现,VVC组的SP-A mRNA的表达水平高于对照组(P0.05),RVVC组的SP-AmR-NA的表达水平明显高于对照组及VVC组(P0.05)。SP-A可能是RVVC患者抗假丝酵母菌的重要物质,其性质或数量的改变可能在RVVC的发病机制中发挥重要作用。