检测人结肠癌组织端粒酶活性的TRAP方法研究

对检测人结肠癌组织端粒酶活性的端粒酶重复序列扩增法(TRAP)进行了研究.当Mg^2＋浓度为1.8 mmol/L、退火温度为55℃时,能得到可靠的检测结果.影响检测结果可靠性的另两个因素是抽提物的反应用量和阳性片段的污染.     

1993年和1994年上海市科学技术委员会资助生命科学领域基础性研究项目

１９９３年和１９９４年上海市科学技术委员会资助生命科学领域基础性研究项目为加强上海市科学技术事业的发展,促进基础研究和应用研究与经济结合,使上海的科技按三层次协调发展,使上海经济建设、科技进步与社会发展有足够的科学技术储备;加速人才培养,同时鼓励优秀...     

去N端信号肽和C端跨膜区猪卵透明带-3β蛋白在原核系统表达的研究

猪卵透明带(Zona pellucida,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白(pZP1、pZP3α和pZP3β)组成。由于抗pZP3β抗体能在体外与人ZP发生交叉反应,因此pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一。为了能在原核系统中获得无卵巢因子污染的pZP3β蛋白,本文采用PCR方法删除了原cDNA中编码5′和3′端信号肽和跨膜区的DNA顺序。扩增的pZP3β基因核心片段(pZP3β″)经DNA测序验证后,通过引入其两端的EcoRI和SalI酶切位点被定向插入pBV221质粒P_RP_L启动子下游的多克隆区。SDS-PAGE分析表明：工程菌在热诱导后能特异地表达pZP3β蛋白,并能在蛋白印迹实验中被兔抗pZP IgGs识别。     

CREB4基因的表达谱分析和功能初步研究

cAMP反应元件结合蛋白(cAMPresponseelement-bindingproteins,CREB)是一个哺乳动物转录因子家族,通过cAMP反应元件(cAMPresponseelement,CRE)介导cAMP和钙离子依赖性基因表达。CREB4是CREB转录家族的新成员。人肿瘤MTCpanel结果显示,CREB4在人肺癌LX-1、结肠腺癌CX-1、前列腺癌PC-3、结肠癌G1-112和胰腺癌G1-103中有表达。构建表达CREB4-LexA和CREB215~395aa-LexA的pLexA融合质粒分别转化含p8opLacZ报告质粒的酵母EGY48菌株,诱导表达后发现CREB4蛋白为转录激活因子,N端决定其转录激活活性。亚细胞定位结果显示,全长CREB4蛋白定位于细胞质,而缺失C端假定转膜结构域的CREB41~275aa蛋白突变体则转移至细胞核内。表达谱结果显示CREB4蛋白可能在人多种肿瘤组织的基因表达调控中起作用,其C端假定的转膜结构域与其转录激活功能密切相关。