利用cut&tag技术探究LHX9基因在颗粒细胞的调控机制

摘要 目的：在人卵巢颗粒细胞癌细胞株KGN中探索转录因子LHX9下游主要的靶基因及其调控。方法：首先我们采用实时荧光定量PCR观察KGN细胞在卵泡刺激素（FSH）干预前后性腺分化和性激素合成过程中重要基因的表达情况，同时我们利用cut&tag测序技术在两组细胞中识别LHX9下游靶基因，并采用双荧光素酶报告实验对重要靶基因NR5A1的调控进行了验证。结果：实时荧光定量PCR结果显示，通过加FSH处理12小时后，LHX9和NR5A1基因的mRNA水平表达降低，相反的，StAR和CYP19A1基因的mRNA水平表达增高；通过cut&tag测序技术和生物信息学分析，我们发现LHX9下游基因主要分布在内吞作用、细胞衰老、肿瘤相关通路、细胞周期、凋亡、卵母细胞减数分裂、雌激素信号转导等通路上。LHX9可以转录调控性腺分化以及类固醇激素合成的一些重要基因，其中包括NR5A1和SOX9等，荧光素酶报告基因证实了LHX9可以直接结合NR5A1基因的启动子区。结论：本研究利用cut&tag测序技术，发现转录因子LHX9对性腺分化和性激素合成的关键基因有转录调控作用，对深入理解LHX9基因对生殖系统的作用具有重要意义。