利用RNAi逆转录病毒载体系统对人朊病毒蛋白表达的稳定抑制

朊病毒是引起可传染的致死性海绵状脑病的致病因子,细胞中正常的朊病毒蛋白(PrPC)在该疾病病程发展中起着必不可少的作用。同时,PrPC已被证明在胃癌、乳腺癌等癌症中发挥着保护癌细胞的作用。根据人源PrPC(HuPrPC)cDNA序列,本研究设计了4种19nt的siRNA,将其构建成RNAi逆转录病毒载体系统,进行了其对HuPrPC表达的抑制效应的分析,从中获得了能高效稳定抑制HuPrPC表达的3种靶向序列,其中si626(5′-GGTTGAGCAGATGTGTATC-3′)的抑制效果最为明显,其抑制效率可达85%以上。随后,利用筛选出的si292和si626的稳定干扰细胞系进行了细胞浸润性实验,结果发现,PrPC干扰细胞系细胞浸润能力显著下降。这为进一步研究朊病毒疾病的基因治疗、以PrPC为靶标进行PrPC相关癌症的辅助治疗研究奠定了一定的基础。     

MTX诱导神经管畸形动物模型的建立

目的:通过二氢叶酸还原酶(DHFR)竞争性抑制剂甲氨蝶呤(MTX)建立叶酸缺乏的神经管畸形(NTDs)动物模型。方法:本研究用孕7.5天C57BL/6J小鼠,采用腹腔注射(ip)不同剂量的MTX建立叶酸代谢障碍的小鼠NTDs模型,LC/MS/MS及酶学方法检测胚胎组织中叶酸相关代谢产物水平及DHFR活性。结果:最佳的致畸剂量为,MTX 4.5 mg/kg,其NTDs发生率最高为31.4%。畸形的胎鼠表型多数为后脑泡未闭,且其身长(4.21±0.76),体重(9.49±3.48)均明显低于对照组(6.32±0.56;22.76±3.23)(P0.05;P0.05)。MTX实验组的胚胎组织中DHFR的活性较对照组显著降低(P0.05),5-MeTHF和5-FoTHF的浓度和对照组相比也明显降低(P0.05)。结论:本研究成功的建立了叶酸缺乏的神经管畸形动物模型。