蟾蜍血清梭曼水解酶的酶学性质及其单克隆抗体的制备

蟾蜍血清梭曼水解酶(TSS)已被纯化.采用微量联苯胺法对该酶的酶学性质进行研究表明,该酶有两个最适pH,分别是pH7和pH10;最适作用温度为30℃;以梭曼为底物,在pH7.73,1/15 mol/L PB, 30℃条件下测定该酶的米氏常数为5.864 mmol/L,最大反应速度为692 μmol/L. Mg2+、Ca2+对TSS有激活作用,而Ni2+、Cu2+、Fe2+、Na+、K+对酶活性无明显影响.用TSS免疫Bal b/c小鼠,取其脾细胞在PEG4000作用下与P3x63-Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞进行融合,获得8株能分泌抗TSS单克隆抗体的杂交瘤细胞株:AC11,AE8,DA3,DE5,DG3,EB4,EC4,EH4.用酶联免疫吸附试验对其分泌的抗体滴度进行检测,其腹水滴度最高可达2×107,对其中4株杂交瘤分泌的抗体相对亲合力进行测定,它们的大小顺序为DA3＞EH4＞DG3＞EC4;对其中6株杂交瘤分泌的抗体进行免疫球蛋白类型鉴定表明,6株单抗均为IgG1类.上述8株杂交瘤在体外连续培养6个月,分泌抗体水平未见下降.     

半抗原与载体的最佳分子结合比

中国鲎血蓝蛋白、破伤风类毒素、白喉类毒素和牛血清白蛋白与对氧磷偶合为人工抗原时最佳分子结合比分别为300,21-35,19和11mol/mol(10,32-53,30和17mol/15~5daltons)。结合比达6—10mol/10~5daltons以上,都有一定的免疫效果。     

胞壁酰二肽促进对氧磷抗体的生成

在对氧磷人工抗原家兔免疫实验中,MDP促进对氧磷抗体的生成。MDP的水溶液使免疫兔恒定地产生对氧磷抗体,提高血清内抗体水平,并提高免疫兔对1个致死量对氧磷染毒的耐受能力。MDP的乳剂效果更好,明显提高免疫兔对2个致死量对氧磷的抗毒能力,1.0mg/kg的MDP效果与福氏完全性剂相当,小量MDP与对氧磷一破伤风类毒素化学结合后即能显示较大剂量MDP混合物的免疫效果。