重组腺相关病毒2型转导人外周血单核细胞来源树突状细胞的研究

To find out the infection efficiency of recombinant adeno-as sociated virus 2-mediated exogenou s genes in human peripheral blood monocyte-derived dendritic cells(D Cs),the process of transfection wa s investigated by FITC-labeled rAA V2,and observed under confocal mic roscope.Newly separated dendritic cells were tranfected by rAAV2-luc and rAAV2-GFP at different MOI,and transfection efficiency were detec ted by luminometer for rAAV2-luc a nd flow cytometry for rAAV2-GFP.Th e results were elucidated in four different assay systems:(1)60min w as needed for rAAV2 to bind on den dritic cells,and got into cells in the following 10min;(2)the express ion of luc could be detected at th e MOI as low as 1×10~5v.g/cell,and the expression plateau was reached by the MOI of 10~6～10~7v.g/cell,furt her increase of MOI had no functio n on expression level;(3)transgene expression was detected after 48h, and maintained a higher expression level from 96h to 240h after infec tion;(4)7days postinfection of rAA V2-GFP,5%～18% dendritic cells were GFP positive. These data suggest th at rAAV2 vector can efficiently in fect monocyte-derived dendritic ce lls and mediate exogenous gene exp ression,and that the application o f rAAV2 as vector may be useful fo r gene transfer to dendritic cells in ex vivo immunotherapy.     

2型重组腺相关病毒体外转导培养细胞的研究

为揭示2型重组腺相关病毒感染哺乳动物细胞的一些转导特征,构建并制备了一种携带萤火虫荧光素酶基因的重组2型腺相关病毒rAAV2-Luc,研究了该重组病毒体外转导哺乳动物细胞的量效关系;肝素对转导的拮抗作用;rAAV2的竞争抑制作用;丁酸钠对表达水平的增强作用.结果显示,在一定范围内,随着rAAV2-Luc感染细胞的感染复数(MOI即每个细胞感染的病毒基因组数)值增高,荧光素酶的表达水平也增高;但更高的MOI(＞107)反而使荧光素酶的表达水平下降.肝素可特异性阻断rAAV2介导的荧光素酶表达.携带不同基因的2种rAAV2病毒相互具有明显的竞争抑制作用.丁酸钠可显著增强rAAV2介导的荧光素酶表达水平.本研究对rAAV2载体介导的基因转移研究具有一定的指导意义.     

左卡尼汀对慢性心力衰竭患者心功能的影响

目的:探讨左卡尼汀辅助治疗慢性心力衰竭的疗效及其安全性.方法:选取我科慢性心力衰竭住院患者60例,随机分为左卡尼汀治疗组和对照组.两组均接受利尿剂、洋地黄等常规抗心衰治疗,左卡尼汀治疗组在常规治疗基础上加用左卡尼汀3g/次,每天一次,连续静脉注射7d.治疗前后测定和比较两组患者的血清半乳糖凝集素3和脑钠尿肽(BNP)水平、6min最大步行距离(6MWT)、左室射血分数(LVEF)及心功能.结果:治疗前,两组Galectin-3、BNP水平、LVEF、6min最大步行距离比较均无统计学差异(P＞0.05).治疗后,两组Galectin-3、BNP水平均分别显著低于治疗前,而LVEF、6min最大步行距离均分别显著高于治疗前,差异均有统计学意义(P＜0.05),且左卡尼汀治疗组Galectin-3、BNP水平显著低于对照组,而LVEF、6 min最大步行距离显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后,左卡尼汀治疗组和对照组的治疗总有效率分别为96.7％和80％,左卡尼汀治疗组显著高于对照组(P＜0.05).两组不良反应的发生情况比较无明显统计学差异(P＞0.05).结论:常规治疗的基础上联合左卡尼汀可以显著改善心衰患者的心功能,增加其运动耐量,改善患者的预后,且无明显不良反应,值得在临床上推广应用.     

基因治疗心肌缺血的载体应用新进展

近年来,随着基因治疗技术的不断进步,为心肌缺血的治疗开辟了一条全新的途径,并取得了一些令人鼓舞的进展。基因治疗主要包括治疗基因、基因转移载体以及基因导入途径三个方面。基因转移载体又在治疗基因和基因表达之间起着桥梁作用,因此,发展安全、高效的基因转移系统是基因治疗的关键之一。目前用于基因治疗心肌缺血基因转移的载体主要有病毒载体和非病毒载体。下面将就不同载体在心肌缺血的基因治疗中的应用进展进行简要的总结。     

慢性心力衰竭合并贫血的研究进展

心力衰竭是是临床上常见的急症,也是心血管疾病当中许多器质性心脏病晚期的并发症,其有较高的发病率和死亡率,并且严重影响着心血管疾病患者的生活质量。近些年来越来越多的国内外研究证明慢性心力衰竭患者常合并贫血,并且发病率随着心脏损害程度加重而增加。贫血与慢性心衰患者的生活质量及预后密切相关,其发病原因是多因素且较复杂的,治疗也是多方面的,本文主要概括近些年来国内外研究对慢性心力衰竭合并贫血有关的认识和进展。     

美托洛尔联用普伐他汀对慢性心力衰竭患者血浆NT-proBNP、CRP分子水平及心功能的影响

目的:了解美托洛尔联合普伐他汀对慢性心力衰竭(CHF)患者血浆N-末端脑钠素前体(NT-proBNP)与C-反应蛋白(CRP)两分子水平及其心功能的影响。方法:156例CHF患者随机分为美托洛尔治疗组、普伐他汀治疗组与美托洛尔联用普伐他汀治疗组,每组患者52例。三组患者均予常规抗心衰治疗的基础上分别加入一定剂量的上述药物,疗程16周。用彩超测定患者治疗前后左心室射血分数、左心室舒张末内径;用ELISA法测定血浆N2末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平的变化、用散射比浊法测定血浆中C反应蛋白(CRP)水平的变化。结果:治疗16周后,三组患者的左心室射血分数与左心室舒张末内径均得到明显的改善(P<0.05);三组患者血浆中NT-proBNP与CRP分子水平均呈现一定程度的下降(P<0.05);其中效果最明显者为美托洛尔联用普伐他汀组。且三组患者血浆中NT-p roBNP分子水平与LVEF、CRP分子水平与LVEF增加均呈负相关的趋势。结论:美托洛尔联合普伐他汀对慢性心力衰竭时可显著降低患者血浆中NT-proBNP和CRP分子水平,疗效明显,值得借鉴。     

美托洛尔联用普伐他汀对慢性心力衰竭患者血浆NT-proBNP、CRP分子水平及心功能的影响

目的：了解美托洛尔联合普伐他汀对慢性心力衰竭（CHF）患者血浆N-末端脑钠素前体（NT-proBNP）与C-反应蛋白（CRP）两分子水平及其心功能的影响。方法：156例CHF患者随机分为美托洛尔治疗组、普伐他汀治疗组与美托洛尔联用普伐他汀治疗组,每组患者52例。三组患者均予常规抗心衰治疗的基础上分别加入一定剂量的上述药物,疗程16周。用彩超测定患者治疗前后左心室射血分数、左心室舒张末内径;用ELISA法测定血浆N2末端脑钠肽前体州T—proBNP）水平的变化、用散射比浊法测定血浆中c反应蛋O（CRP）水平的变化。结果：治疗16周后,三组患者的左心室射血分数与左心室舒张末内径均得到明显的改善（P〈0．05）;三组患者血浆中NT-proBNP与CRP分子水平均呈现一定程度的下降（P〈0．05）;其中效果最明显者为美托洛尔联用普伐他汀组。且三组患者血浆中NT-proBNP分子水平与LVEF、CRP分子水平与LVEF增加均呈负相关的趋势。结论：美托洛尔联合普伐他汀对慢性心力衰竭时可显著降低患者血浆中NT-proBNP和CRP分子水平,疗效明显,值得借鉴。     

HIF在心肌缺血再灌注中的作用

缺氧诱导因子（HIF）是参与缺氧转录反应调控的转录调控因子,HIF的活化在缺氧时细胞中保护起重要作用,HIF及HIF依赖的基因如诱导型一氧化氪舍酶（iNOS）、血红素氧舍酶（HO-1）的激活可减轻心脏的缺血．再灌注损伤,HIF调节的基因表达可能介导了缺血预处理和缺血后处理的保护作用。本文对HIF在心肌缺血再灌注损伤中的保护作用予以综述。     

一种高效快速浓缩腺相关病毒载体的方法

腺相关病毒载体(adeno associatedviralvector,AAVvector)是一种具有良好应用前景的基因治疗载体。研究中往往需要高滴度的重组AAV病毒(>105v g /细胞),为此利用完整的腺相关病毒颗粒具有耐受有机溶剂的特点,创造性地采用了一种用乙醇沉淀重组AAV病毒的方法,达到了高效、快速浓缩AAV载体的目的。结果表明,乙醇沉淀法可以高效浓缩AAV载体,并且对病毒的结构和活性没有明显影响。用这种方法可以方便地将低滴度的AAV病毒变成高滴度,解决动物体内实验中每点注射体积受到限制的问题。