一种检测慢病毒滴度的实时荧光定量PCR方法

目的:建立一种有效、灵敏、准确的慢病毒滴度的分子检测方法。方法:分别构建慢病毒调控元件WPRE和单拷贝基因白蛋白(Alb)基因的重组质粒,紫外吸收法测量后经数学换算得到相应的拷贝数,以梯度稀释质粒为模板,利用基于SYBR Green的荧光定量PCR制作标准曲线,最后将待测样品的Ct值代入标准曲线,根据相应公式计算慢病毒滴度。结果:WPRE元件和Alb基因质粒的标准曲线回归方程分别为y=-4.255x+46.047、y=-2.8735x+35.831,相关系数R2均大于0.99,扩增效率E均大于95%,且熔解曲线波峰单一。计算获得不同稀释比例待测病毒的滴度为(4.3±0.9)×106TU/mL。结论:基于SYBR Green的实时荧光定量PCR方法操作简便,能够准确测定慢病毒滴度。     

一种由寡核苷酸介导的大肠杆菌ftsZ基因无痕敲除的方法

现阶段,适用于大肠杆菌的无痕敲除方法普遍存在周期较长、操作步骤复杂等问题。为了进一步改进和优化无痕敲除技术,采用单链寡核苷酸介导的Red同源重组系统（single strand oligonucleotide-mediated recombineering,SSOR）,通过两步连续的同源重组,敲除了一种编码类似微管蛋白的GTP酶的ftsZ基因。该方法可快速高效无痕的敲除目的基因,为大肠杆菌基因组改造提供了有效方法,另外,ftsZ基因缺失株的获得也为研究ftsZ基因功能创造了条件。