牛RXRG基因遗传变异与双胎性状的关联分析

以视黄素X受体基因g(retinoid X receptor-gamma, RXRG)作为牛双胎性状的候选基因, 运用测序法寻找牛RXRG基因SNPs, 筛查到一个新的多态位点A1941G, 该位点位于3′UTR。运用PCR-RFLP法验证并分析该位点在鲁西牛双胎群体和单胎群体及中国西门塔尔牛、安格斯牛和西蒙杂交牛单胎群体间的多态性, 结果表明, 在鲁西牛双胎和单胎群体中分布A、B两个等位基因,处于中度多态。经χ2适合性检验, 鲁西双胎牛群体在该位点未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P < 0.05)。将鲁西牛群体的A1941G位点的基因型效应与双胎性状进行关联分析, 卡方独立性检测结果显示, 基因型分布在鲁西单、双胎牛群体上差异达到极显著水平(P < 0.01)。     

piggyBac转座子在牛基因组的整合位点及特征分析

piggyBac(PB)转座子作为一种遗传工具被广泛应用于多个物种的转基因及插入突变研究, 目前PB转座子在牛中的相关研究还较少。为了获得PB转座子在牛基因组中的整合位点, 总结其转座特征, 文章构建了PB[CMV-EGFP]和pcDNA-PBase二元转座系统, 利用细胞核电转技术共转染牛耳组织成纤维细胞, 经G-418筛选, 获得了稳定转染EGFP的转基因细胞系; 提取细胞基因组DNA, 利用基因组步移技术扩增PB转座子5′ Bac区插入位置的DNA序列; 通过与牛基因组序列进行BLAST比对, 得到PB转座子在牛基因组中的插入位点。文章共获得了8个有效的整合位点, 但仅有5个位点定位到染色体1、2、11和X染色体上。序列分析表明：在牛基因组中, PB转座子可特异性的插入到“TTAA”位置, 并整合到基因间的非调控区; 分析整合位点“TTAA”相邻一侧的5个碱基组成, 发现PB转座子5′端倾向于插入到GC(62.5%)碱基富集区。该研究表明, PB转座子可以在牛基因组中发生转座, 获得的整合位点信息为利用PB转座子在牛上开展遗传学研究提供了理论参考。     

牛pAcGFP-FADD融合蛋白真核表达载体构建及在CHO-K1细胞中的表达

FADD是Fas/FasL系统的一个信号连接蛋白,通过传递凋亡信号,介导细胞凋亡.为了揭示FADD在牛卵泡发育过程中的调控作用,采用RT-PCR从牛卵巢组织中扩增FADD基因,将其cDNA终止密码子删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经BglⅡ/EcoR Ⅰ酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染CHO-K1细胞,观察有无荧光的表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、表达情况.结果表明,成功克隆牛FADD基因,通过PCR方法在FADD阅读框两端引入了Bgl Ⅱ和EcoR Ⅰ克隆位点,并于起始位点前加入Kozak序列,成功构建pAcGFP- bFADD融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染CHO-K1 24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,转染效率可达65%,通过RT-PCR扩增出654 bp的转录产物,并用Western blotting检测到51.4 kD目的蛋白的表迭.